弹性纤维染色

　　弹性纤维主要由弹性蛋白（一种黄色硬蛋白，它是黄色弹性纤维组织的主要成分，干燥时易脆，而湿润时呈弯曲并富弹性）构成。它广泛分布于全身的各个部位，尤以循环系统，呼吸系统和皮肤系统为甚。新鲜时它呈黄色，固又称为黄色纤维。弹性纤维较细，直径0.2-1.0um，有分支，不成束。但可交织成网。它富有弹性，容易拉长，但不能拉到超过它的极限，外力除去后又恢复原状。弹性纤维与胶原纤维交织在一起，在HE染色的标本上，含量少时不易与胶原纤维区别，含量多时呈折光性强的淡粉红色。由弹性蛋白构成弹性纤维的鞘，并非完全的密封，在其周围有许多微细孔，这些微细孔可作为营养物及排除废物的场所。

　　弹性纤维主要来源于带有平滑肌特征的间胚叶细胞，少量可由脉管的内皮细胞产生，先形成前弹性蛋白（pro-elastin），这时在电镜下可见到直径为200nm的电子密度微纤维，在成熟的弹性纤维蛋白，电密度减少或丧失，较为均匀一致。

　　弹性纤维与胶原纤维，网状纤维不同，它极难容于有机或无机的溶液里。

　　一、弹性纤维的变形和病理变化

　　　随着年龄的增长，特别是到了老年的时候，弹性纤维可发生生理性的变化，这时可观察到弹性纤维的纵行分裂，断成碎片，最后成为颗粒，这些变化同时也伴有化学变化，氨基酸和钙的含量有所增加，这些变化在皮肤是最明显的。当有病变的时候，我们便可在切片观察到有的弹性纤维增生，有的被破坏，断裂、崩解，失去弹性。如主动脉瘤，就可见到瘤壁上的弹性纤维已经失去了弹性。这是由于主动脉壁的弹性纤维受到内压的不断冲击，弹性纤维过度牵拉，超过它的极期，再也恢复不了原状，因此在切片标本上（特殊染色）只能见到其痕迹或反应物。

　　二、弹性纤维的染色方法

　　（一）.Weigert氏雷锁辛品红法（1898）（Weigertsresorcin-fuchsinmethod）

　　试剂的配制：

　　Wergert氏雷锁辛品红液：

　　碱性品红2g

　　雷锁辛4g

　　蒸馏水200ml

　　30%三氯化铁25ml

　　取500ml的烧瓶加入蒸馏水和雷锁辛，用玻棒搅拌均匀，加热直至沸腾，持续1-2min，再加入30%的三氯化铁水溶液继续搅拌直至煮沸2-3min后，此时溶液的颜色变为紫罗蓝色，冷却后过滤。倒去滤液，将滤纸和沉淀物一起放入烤箱中一起烤干。取200ml95%酒精，将滤纸与沉淀物一起放入加热溶解，除去滤纸，冷却后过滤，用95%酒精凑足200ml，再加入4mlHCL。即可使用，保存于4℃冰箱，可长期使用。

　　操作方法：

　　1、切片脱蜡至水，

　　2、0.5%高锰酸钾水溶液氧化5min，

　　3、水洗，

　　4、2%草酸漂白1-2min，

　　5、水洗，

　　6、入95%酒精，

　　7、入Weigert氏雷锁辛液，室温染1-2h，

　　8、95%酒精分化至背景清晰为止，

　　9、VanGiesson氏液或核固红作对比染色，

　　10、脱水透明，封固。

　　弹性纤维：深蓝或深黑色，其余成分视用何种对比染色而定。

　　1、可将微细弹性纤维显示出来。

　　2、方法可靠，颜色鲜红色，切片可保存。

　　3、配制好的染液可使用较长时间。

　　注意事项：

　　11908年Hart应用该法，将1%HCl酒精稀释了Weigert氏原液。即原液5-20ml。酸酒精30-40ml。结果弹性纤维显示蓝色黑色。

　　2、1929年French改良了这种方法，用Weigert氏原液中的2g品红，改为1g结晶紫。结果弹性纤维显示深蓝绿色。

　　3、1929年Sheridan改良了该法，Weigert氏原液中的2g品红改用为2g结晶紫。结果弹性纤维显示为绿色。

　　4、在溶化沉淀物时，应隔水溶化，不要直接于明火上加热熔解。

　　5、配制后的染液用小磨口瓶装，以防溶液挥发，影响染色效果。

　　6、该溶液虽可保存较长时间，但仍以新鲜配制为好。

　　7、切片在透明时，有人提出切片不要经过苯酚二甲苯。其原因之一是对已染色的切片有影响。　　（二）．Gomori's醛品红法（1950）（Gomrori’saldehyde-fuchsinmethod）试剂的配制：碱性品红1g

　　70%酒精98ml

　　三聚乙醛1ml

　　浓盐酸1ml

　　将品红溶于酒精里，再加入HCl和三聚乙醛，混合后于室温放置2-3天后即可成熟，保存于4℃冰箱内，使用期1-2个月。

　　操作方法：

　　1、切片脱蜡至水，

　　2、0.5%高锰酸钾水溶液氧化5min，

　　3、水洗，

　　4、2%草酸漂白1-2min，

　　5、水洗，

　　6、入70%酒精稍浸泡1min，

　　7、入染液中浸染10-15min，

　　8、70%酒精分化，至无余色脱下为止，

　　9、0.5%橙黄G做对比染色，20-30s，

　　10、脱水，透明，封固。

　　弹性纤维深蓝色，背景不同程度的黄色。

　　1、可把较细的弹性纤维给予显示出来。

　　2、它不但染弹性纤维，也可染胰腺的B细胞，肥大细胞，神经细胞的尼氏小体，表面肝炎抗原（HBsAg）粘蛋白等。

　　3、方法可靠安全，操作得当，可获满意结果。

　　4、颜色鲜艳，利于摄影。

　　注意事项：

　　1、醛品红液在成熟之后方可使用，染色最佳时间一般在7-10天，

　　2、分化时应随时观察切片，防止褪色过度，可改用95%酒精为分化剂。

　　（三）.地衣红技术（orceintechique）（Unna.1891）

　　染液配制：

　　地衣红1g

　　70%酒精99ml

　　浓HCL1ml

　　将地衣红溶于酒精中，也可以用水浴锅加热以助其溶解，冷却过滤后加入HCL于室温放置1-2天。

　　操作方法：

　　1、切片脱蜡至70%酒精，

　　2、入上述染液中浸染3h（室温）或1-2h（37℃）

　　3、70%酒精分化，

　　4、脱水，透明，封固。

　　弹性纤维棕红色或深棕色。

　　（四）.Verhoff氏酒精苏木素技术（1908）（Verhoff'salcoholichematoxylinted）

　　染液的配制：

　　A.5%酒精苏木素.

　　B.10%三氯化铁水溶液.

　　C.lugol's碘.

　　溶2g碘片于少数的蒸馏水中，再溶1g的碘化钾，两者总量为100ml。

　　操作方法：

　　1、切片脱蜡至水，

　　2、用上述染液（A.2分，B.4分，C.4分）染色10-15min，

　　3、水洗，2%的三氯化铁分化至弹性纤维清晰为止，

　　4、水洗，95%酒精除去沉淀于切片的碘，

　　5、水洗，用VanGiesson或中性红作对比染色，

　　6、脱水，透明，封固。

　　弹性纤维黑色，背景据不同的对比染色而定。

　　1、操作简单，易掌握。

　　2、染色的时间短，适宜于临床活检。

　　注意事项：

　　1、苏木素为储存液，但每次以新配为佳，

　　2、混合后的染液须当次用完，不能保存，

　　3、分化时应于镜下控制，以免过染或淡染。三、弹性纤维染色的临床应用　　1.用于区别正常的动脉和静脉以及观察动脉有病变时血管壁各层的情况，如动脉粥样硬化时的各类变化。

　　2.用于区别观察各种疾病对弹性纤维的影响及变化，如原发性或继发性高血压可见主动脉弹力纤维增生，老年弹力纤维增多症。心内膜弹力纤维增生症常都可见到弹力纤维断裂，梅毒性主动脉炎和皮肤的环状肉芽肿，动脉粥样硬化均可见到裂解，崩解的弹力纤维。

　　3.用于弹力纤维性假黄瘤的诊断。

　　该病镜下见真皮中下部结缔组织变性，呈团块状或条索状，弱嗜碱性用弹力纤维染色法可以鉴别。四、对染好弹力纤维的总结和体会　　1.这种方法对固定液没有特殊要求，一般福尔马林固定液即可，但时间不宜过长，过长可影响染色。另外，不要用含有铬酸盐如Zonker氏固定液固定。

　　2.认真配制好各种试剂。

　　试剂配制的好坏，直接关系到染色的成败，因此要获得好的染色结果，就必须先配制好试剂，每一种试剂都必须认真仔细操作。在这些方法中，有的可配为储存液，有的则应在临用前配制。应注意的是，在配制Weigert氏雷琐辛品红时，可产生大量的气体，因此要用较大的容器来配制。

　　3.切片的氧化，漂白。

　　上述的四种方法，作者都作了大量的对照。取同一病例，分为甲乙两组，甲组的切片的颜色比乙组的鲜艳，这是为什么呢？我们都知道，所有的组织经甲醛固定后，都形成了醛键，这些醛键的存在，影响了组织跟染液发色基团的更好结合。为了使组织能更有效的显示出来，利用某些试剂进行氧化，把这些醛键打开，然后再对切片进行漂白，使切片不含有其它的杂质，着色更纯正，实验证明效果很好。