资料包括：论文（85页37182字）
说明：
摘要：第一部分肾母细胞瘤16q杂合性丢失及其临床意义目的：肾母细胞瘤是小儿最常见的肾脏恶性肿瘤。16q杂合性丢失（LOH）见于约20－30％的肾母细胞瘤患儿，并常提示预后较差；但国内研究尚无涉及其与临床参数联系的报道。本实验探讨肾母细胞瘤16q杂合性丢失的频率及研究其与选择性病理临床参数的关系。方法：32例患儿年龄2月至13岁（中值38个月），1994－1999年在上海医科大学附属儿科医院治疗，将其冰冻或石蜡组织块，用标准的酚－氯仿法抽提肿瘤组织的DNA及其正常组织DNA，用16q24区域微卫星多肽标记，PCR方法对16q24多肽序列扩增，聚丙烯酰胺凝胶电泳分离PCR产物，行LOH分析。其结果与患儿年龄、性别、临床分期、组织学类型和复发、转移、死亡作统计分析。结果：9例（28.1%）检测到LOH16q，其中1例两条等位基因都丢失；21例（61.9%）无杂合性缺失；2例无信息量。实验结果提示年龄大于24月患儿LOH16q明显增多（P<0.05）；LOH16q发生于临床分期II期或III期明显高于I期（P<0.05）,而II、III期之间无明显差别；LOH16q与性别、肿瘤组织类型无关；LOH16q阳性患儿死亡率是LOH16q阴性患儿的4倍。结论：LOH16q在肾母细胞瘤多见，检测肾母细胞瘤LOH16q，有益于高危人群的分类。[关键词]：肾母细胞瘤16q杂合性丢失（LOH16q）预后第二部分：应用组织切片显微切割技术研究肾源性剩余及肾母细胞瘤的发生目的：肾源性剩余（NR，NephrogenicRest）是癌前病变，在约40%肾母细胞瘤中出现，本实验研究肾母细胞瘤多步骤发生。方法:13例伴有肾源性剩余的肾母细胞瘤石蜡切片用来做显微切割，在11p13,11p15,和16q位点设计引物行PCR扩增，观察杂合性丢失（LOH）发生的阶段及其相关的潜在的抑癌基因。结果:LOH在11p13位点检测到2例，在11p15位点检测到3例，两位点同时缺失1例。肾源性剩余11p能检测出LOH者，其对应的肿瘤中均能检测出LOH。16q位点在肾源性剩余内均未见LOH，而在肿瘤内检测出LOH2例，该2例出现肿瘤复发或转移，16qLOH与间变不相关。结论:在遗传学上，进一步证明肾源性剩余是癌前病变，在肾母细胞瘤发病机制中11p13和11p15LOH是其早期因素，而16qLOH发生较晚，且与间变不相关。本实验证实肾母细胞瘤发病的多阶段模型。第三部分：不同维甲酸饮食下DMH诱导大鼠肾母细胞瘤相关基因的变化目的:维甲酸被用来抑制肿瘤细胞生长和诱导上皮细胞分化。我们探讨其是否对肾母细胞瘤具有相同的作用，小儿肾母细胞瘤来源于未分化的后肾胚基细胞，评价RA对肾母细胞瘤的生长抑制作用及相关基因的表达。方法:对1，2-二甲基肼（1,2-dimethylhy-dragine,DMH）皮下注射Wistar雌性幼鼠而形成的肾母细胞瘤，进行形态学观察和基因检测。观察肾母细胞瘤的形态学，同时分别用流式细胞仪（FCM）、RT-PCR、Northernblot等方法，检测大鼠肾脏、肿瘤和或瘤旁肾组织DNA含量及细胞周期，WT1、RARα、PKCα和c-MYC等基因mRNA的表达。大鼠肾脏或肿瘤分为以下几组：1对照组；2含维甲酸饮食组；3无维甲酸饮食组；4孕鼠及子鼠组（包括含维甲酸饮食和无维甲酸饮食）。结果:无维甲酸饮食组大鼠肾母细胞瘤DI值，S期细胞数，增值指数均高于含维甲酸饮食组和对照组。无维甲酸饮食组的WT1、c-MYC基因的表达量增加，与维甲酸饮食组及对照组相比有显著差别。无维甲酸饮食组的PKCαmRNA表达水平也明显高于维甲酸饮食组和对照组。而无维甲酸饮食组的RARαmRNA表达水平明显低于维甲酸饮食组和对照组，维甲酸饮食组又低于对照组（p<0.05）。RARα基因与WT1基因的表达具有相关性；RARα基因与c-myc基因的表达也具有相关性。
目录：
中文摘要1
英文摘要5
前言10
第一部分肾母细胞瘤16q杂合性丢失及其临床意义
材料与方法13
结果14
讨论16
参考文献18
第二部分应用组织切片显微切割技术研究肾源性剩余及肾母细胞瘤的发生
材料与方法20
结果21
讨论24
参考文献26
第三部分不同维甲酸饮食下DMH诱导大鼠肾母细胞瘤相关基因的变化
材料与对象28
实验方法31
结果45
讨论62
结论69
参考文献70
结论75
博士研究生期间完成论文76
致谢77
附录78
参考文献：
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作者点评：
1.LOH16q多出现于预后差的肾母细胞瘤患儿，它可作为观察预后的指标。
2.在形态学和遗传学上证明肾源性剩余是癌前病变，11p13和11p15LOH是肾母细胞瘤发生的早期因素，而16qLOH发生较晚；证实肾母细胞瘤发生的多阶段过程。
3.WT1、RARα、PKCα、c-myc等基因参与肾母细胞瘤的发生，维甲酸饮食组DMH诱导大鼠肾母细胞瘤的WT1、PKCα、c-myc基因的mRNA表达水平下降，RARα基因表达上升。
4.DMH诱导大鼠肾母细胞瘤发生过程中，RARα基因与WT1基因的表达具有相关性；RARα基因与c-myc基因的表达具有相关性。
5.DMH对孕鼠诱导肾母细胞瘤，孕期无维甲酸饮食组子鼠发生肿瘤明显增多，维甲酸能够降低肿瘤发生率，是胚胎性肿瘤发生的保护性因素，再次证明维甲酸能够促进胚胎发育，防止分化停止和迟滞。
