茶多酚治疗膜性肾小球肾炎机理的探讨

关键词：茶多酚；免疫功能；SOD；GSH-PX

　　提　要　目的：探讨茶多酚治疗肾炎的机理。方法：小鼠灌胃茶多酚7天后测其免疫功能和抗氧化酶的活性。结果：茶多酚可明显抑制小鼠腹腔巨噬细胞及其因子IL-1的活性和NO的生成；抑制小鼠脾细胞产生抗体的能力和血清CIC的含量；抑制小鼠脾细胞增殖反应和总T细胞花环和TH花环的形成。茶多酚还可增强小鼠红细胞SOD和血中GSH-PX的活性，抑制血清中LPO的生成。结论：茶多酚抑制小鼠免疫功能、增强小鼠抗氧化酶的活性可能是其治疗肾炎的机理之一。

StudyoftheMechanismofCuringAnti-membraneGlomerulonephritisbyTeaPolyphenol

DongQun,WuMinyu,QuWeimin,LiuHui,SunRuiyuan

　　（DepartmentofMicrobiology,WannanMedicalCollege,Wuhu　241001）

　　Object:Tostudythemechanismofcuringanti-membraneglomerulonephritisbyTeaPolyphenol（TP）.Method:GivenorallyTPofdifferentdosagetomicefor7days,themice'immunefunctionandenzymeactivitycorrelatinganti-oxygenationweredetected.Result:TPcoulddecreasetheactivitiesofperitonealMΦandIL-1,andtheformationofnitricoxide（NO）.TPcouldinhibittheantibodyformationofspleencellandthecontentofCICinsera,andevidentlydecreasethepercentageoftherosettesofTcellandTHcell,andproliferativereactionofspleencell.TPcouldincreasetheactivitiesofSODinRBCandGSH-PXinblood,decreasethecontentofLPOinsera.Conclusion:TPcouldinhibitimmunefunctionofmiceandpromotetheenzymeactivitiesofanti-oxygenation.

　　Keywords　TesPolyphenol;immunefunction;SOD;GSH-PX

　　已有报道茶多酚可治疗家兔Masugi肾炎［1］，本实验从单核细胞的免疫功能、抗氧化酶的活性两方面探讨了茶多酚治疗肾炎的机理。

　　1　材料和方法

　　1.1　试验药物　茶多酚粉剂（含量＞99%），浙江农业大学茶学系提供，溶于蒸馏水中灌胃。

　　1.2　实验动物　昆明小鼠8～12周龄，雌雄随机，体重21±2g，中国药科大学动物供应科供应。许可证号：苏动（质）95036。

　　1.3　试剂　RPMI1640培养粉为美国GibcoLab产品，批号14-4-97。MTT、硫代巴比妥酸（TBA）、四乙氧基丙烷、5，6-二硫-对二硝基苯甲酸（DTNB）均为Sigma公司。Tris-NH4Cl中的Tris购自华美生物工程公司，批号830227。茶碱购自上海试剂二厂，批号830310。

　　1.4　实验方法　小鼠随机分组后ig蒸馏水或药液0.2ml/10g连续7天后，次日上午眼眶取血，常规分离血清，另取腹腔液、脾备用。

　　1.4.1　腹腔巨噬细胞（MΦ）活性及分泌因子的测定　小鼠给药至第四天，腹腔注射6%淀粉肉汤1.5ml/只一次，再连续用药至第七天，无菌取腹腔液测MΦ活性［2］及白介素1（IL-1）［3］和一氧化氮（NO）［4］的活性。

　　1.4.2　免疫功能的测定　（1）小鼠脾细胞抗体生成能力采用薛昭华等［5］方法，于413nm处测OD值。（2）小鼠血清循环免疫复合物（CIC）含量的测定采用PEG沉淀法［6］，在450nm处测OD值。（3）小鼠脾细胞增殖活性见文献［7］。（4）小鼠T细胞亚群用茶碱法。

　　1.4.3　血中抗氧化酶活性和血清中过氧化脂质的含量测定　用邻苯三酚自氧化法测定小鼠红细胞SOD活性；用DTNB显色法测血中谷胱苷肽过氧化物酶（GSH-PX）含量；用硫代巴比妥酸比色法测血清中LPO含量。

　　2　结果

　　2.1　茶多酚对小鼠腹腔MΦ活性的影响　茶多酚可明显抑制小鼠腹腔MΦ的活性和IL-1的活性，各实验组间差别不显著。中剂量与大剂量茶多酚可抑制NO的产生，见表1。

表1　茶多酚对小鼠腹腔巨噬细胞（MΦ）的活性和介质的影响　（

组　　别只MΦ活性　　（OD570nm）IL-1（OD570nm）NO（μmol／L）蒸馏水　　100.777±0.3290.350±0.0409.617±1.175茶多酚（小）130.482±0.090**△0.300±0.023**9.183±0.351△茶多酚（中）80.398±0.080**0.290±0.038**6.601±0.889*茶多酚（大）110.329±0.066**0.290±0.019**6.011±0.656**地塞米松　140.356±0.110**0.289±0.015**6.241±0.523**

　　与蒸馏水组相比*P＜0.05,**P＜0.01；与地塞米松组相比△P＜0.01；茶多酚小、中、大剂量分别为128mg/kg、255mg/kg、510mg/kg，下同2.2　茶多酚对小鼠脾细胞产生抗体能力和血清CIC含量的影响　大剂量茶多酚可以明显抑制小鼠脾细胞产生抗体的能力，中剂量组小鼠血清CIC的含量低于蒸馏水组，见表2。

表2　茶多酚对小鼠脾细胞产生抗体的能力和血清CIC含量的影响　（

组　　别只QHS法　　（OD413nm）CIC　　（OD450nm）蒸馏水　　100.291±0.0450.425±0.015茶多酚（小）130.251±0.0480.401±0.082茶多酚（中）80.251±0.0420.356±0.012*茶多酚（大）110.210±0.055**0.325±0.045**地塞米松　140.223±0.061*0.315±0.011**

　　与蒸馏水相比*P＜0.05,**P＜0.012.3　茶多酚对小鼠脾细胞ConA增殖活性、总T细胞花环率和TH花环率的影响　茶多酚可抑制小鼠脾细胞对ConA增殖活性，且随剂量增加抑制作用增强。茶多酚也可抑制小鼠总T细胞花环形成和TH花环的形成，见表3。

表3　茶多酚对小鼠脾细胞ConA增殖活性、T细胞花环率和TH花环率的影响

组　　别只增殖活性　　（OD570nm）总T细胞　　花环率（%）TH细胞　　花环率（%）蒸馏水　　90.336±0.08926.30±2.8066.42±6.67茶多酚（小）130.251±0.09619.00±2.08**59.23±10.00茶多酚（中）80.193±0.076*18.88±1.54**54.65±10.41*茶多酚（大）110.145±0.053**11.73±1.76**50.74±7.66**地塞米松　140.157±0.072**14.50±2.80**46.42±8.38**

　　与蒸馏水组相比*P＜0.05,**P＜0.012.4　茶多酚对小鼠血中抗氧化酶和血清中过氧化脂质含量的影响　茶多酚可增强小鼠血中SOD和GSH-PX的活性，降低小鼠血清中LPO的含量，见表4。

表4　茶多酚对小鼠SOD、GSH-PX活性和LPO含量的影响　（

组　　别只SOD　　（U/ml）GSH-PX　　（μmol/L）LPO　　（μmol/L）蒸馏水　　9758±74264±6217.26±2.53茶多酚（小）13745±69△286±4415.39±2.37*△茶多酚（中）8782±86313±23*13.45±1.86*茶多酚（大）11825±92*345±45*△12.12±2.13**地塞米松　14798±83297±3511.79±3.16**

　　与蒸馏水组相比*P＜0.05,**P＜0.01；与地塞米松组相比△P＜0.053　讨论

　　Masugi肾炎模型的病理变化类似膜性肾小球肾炎。目前已知膜性肾小球肾炎的发生机理与抗体的不断形成、免疫复合物的局部沉积、细胞免疫功能障碍、T细胞亚群的异常有关。本实验结果提示茶多酚有类似于地塞米松的作用，可抑制小鼠腹腔MΦ的活性，抑制MΦ分泌的炎性介质IL-1和NO的生成。茶多酚抑制小鼠脾细胞产生抗体，使血清中抗原抗体复合物（CIC）减少，沉积到肾小球基底膜上的免疫复合物也会相应减少，病情减轻。茶多酚能抑制小鼠脾细胞的增殖，降低总T细胞花环、TH细胞花环的形成率。茶多酚还可增强SOD和GSH-PX的活性，可保护细胞和细胞膜，缓解炎症。明显抑制LPO的生成，减少LPO对细胞结构及功能的严重损害，有利于炎症的恢复。本实验的结果显示，茶多酚可通过抑制小鼠的免疫功能，增强小鼠血中抗氧化酶的活性来达到治疗肾炎的目的。

　　参考文献

　　1　桂常青，洪宗元，杨解人，等.茶多酚治疗家兔Masugi肾炎模型.中国药理学通报，1998；14（5）∶467

　　2　陈哲生.噻唑蓝比色法用来研究人淋巴细胞和小鼠巨噬细胞的活性.上海免疫学杂志，1992；12（5）∶269

　　3　杨贵贞，主编.免疫生物工程纲要与技术.长春：吉林科技出版社，1991∶201

　　4　丁传林，胡晓玲，马思才，等.小鼠腹腔巨噬细胞诱生一氧化氮的实验研究.上海免疫学杂志，1998；18（1）∶28

　　5　薛昭华，刘延兵，蔡昌学，等.中药“抗炎6号”注射液抗感染作用机理的实验研究.武汉医学院学报，1984；25（5）∶344

　　6　沈玉清主编.免疫学和免疫检验学.北京：中国医药科技出版社，1989∶328

　　7　钱玉昆主编.实用免疫学新技术.北京：北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1993∶11