口腔扁平苔藓中Caspase

　　aP<0.05vs正常黏膜组.

　　2.2Caspase3表达情况OLP中Caspase3的阳性率上皮层和固有层均为100%，上皮层主要表达于基底细胞和棘细胞的胞质，亦可见胞核着色，基底细胞层及近基底细胞层阳性细胞为中度阳性表达，棘细胞层阳性细胞为弱阳性表达（图1B）;固有层近基底膜的淋巴细胞和部分炎性细胞胞质和胞核均呈强阳性或中度表达.正常组上皮层阳性率为100%，均为弱表达；固有层阳性率为28.6%（2/7），为个别细胞弱阳性表达.和正常组相比，OLP患者上皮层角化细胞和固有层淋巴细胞表达Caspase3明显增强（P<0.025，表2）.

　　表2口腔扁平苔藓与正常对照组中Caspase3的表达水平（略）

　　aP<0.025vs正常黏膜组.上皮层，固有层分别指上皮层角化细胞和固有层淋巴细胞.

　　2.3TNFα和TNFRΙ表达情况OLP的TNFα阳性表达率是75.8%（25/33），其中上皮层和固有层都有表达者14例，仅上皮层表达者3例，仅固有层表达者8例，但上皮层和固有层的阳性表达率各有不同.OLP组TNFα的上皮层阳性表达率51.5%（17/33）明显低于正常对照组的阳性表达率100%（7/7）（P<0.025），而OLP组的TNFα固有层的阳性表达率66.7%（22/33）明显高于正常对照组的阳性表达率0.0%（0/7）（P<0.025），糜烂型组固有层中TNFα表达明显高于非糜烂型组（P<0.05,表3）.TNFα阳性染色主要弥漫分布于胞质，阳性细胞呈弥散性分布.上皮层阳性细胞主要分布于基底层及棘层（图1C）.固有层中主要是围绕上皮钉突浸润的淋巴细胞呈阳性表达，大多数正常对照组上皮层细胞中TNFα强阳性表达，而固有层细胞中无表达.　　OLP中TNFRI的阳性表达率是48.5%（16/33），其中上皮层和固有层都有表达者为9例，仅上皮层有表达者6例，仅固有层有表达者1例，但上皮层和固有层的阳性表达率各有不同.OLP组的TNFRI的上皮层阳性表达率45.5%（15/33）明显高于正常对照组的0.0%（0/7）（P<0.025），而固有层阳性表达率30.3%（10/33）明显低于正常对照组的85.7%（6/7）（P<0.025,表3）.TNFRI阳性染色主要定位于细胞质，阳性细胞局限于上皮基底层，呈带状分布；固有层的淋巴细胞呈阳性，散在分布（图1D）.

　　表3口腔扁平苔藓与正常对照组中的TNFα和TNFRΙ的表达水平（略）

　　aP<0.025vs正常黏膜组,bP<0.05vs非糜烂型组.

　　2.4OLP中Caspase3,TNFα和TNFRΙ的表达与细胞凋亡的关系OLP上皮细胞Caspase3阳性表达强弱与上皮细胞的AI呈正相关（r=0.631,P<0.05），固有层淋巴细胞Caspase3的阳性表达强弱与其自身的AI无相关性（P>0.05）.TNFα/TNFRI与OLP上皮层及固有层细胞的AI有相关性，SpearmanA：口腔扁平苔藓中固有层淋巴细胞中可见胞核被染成棕黄色的凋亡细胞TUNEL×400；B：口腔扁平苔藓上皮层基底细胞Caspase3表达阳性SP×400；C：口腔扁平苔藓上皮细胞胞质TNFα阳性表达SP×400；D：口腔扁平苔藓固有层淋巴细胞胞质TNFRI阳性表达SP×400.

　　图1口腔扁平苔藓中TUNEL法阳性染色及Caspase3,TNFα和TNFRI蛋白的阳性表达（略）

　　等级相关分析显示OLP固有层淋巴细胞TNFα阳性表达与上皮细胞的AI呈正相关（r=0.971,P<0.05），与其自身的凋亡则呈负相关（r=-0.533,P<0.05）.OLP上皮细胞TNFRI阳性表达与上皮细胞的AI呈正相关（r=0.583,P<0.05）；固有层淋巴细胞TNFRI阳性表达与其自身的AI呈正相关（r=0.699,P<0.05）.

　　OLP为细胞介导的自身免疫性疾病，病变的发生发展与细胞凋亡异常相关［1］.本实验结果显示，OLP上皮细胞的凋亡指数比正常对照组高，与Hirota等［2］报道的结果一致.凋亡的上皮细胞多分布于萎缩型的OLP，这可能是因为大量上皮细胞的凋亡导致了上皮层的萎缩、变薄，提示OLP上皮萎缩的改变可能与凋亡相关；同时观察到在凋亡的上皮细胞较密集的OLP病例，多出现较明显的基底细胞液化变性，故推测OLP基底层上皮细胞的液化变性与凋亡有关.而观察到OLP固有层淋巴细胞的凋亡指数比正常对照组有所降低则提示OLP固有层中淋巴细胞的凋亡受到抑制，细胞不能经历正常的凋亡过程而聚集在OLP的固有层中.

　　Caspase家族是细胞发生凋亡的关键酶类，Caspase3是最重要的效应型Caspase.本研究结果表明，OLP患者口腔黏膜上皮表达Caspase3明显增强（P<0.05），提示OLP中Caspase家族的级联反应是在OLP上皮层的生发层内被激活的，胞核阳性表达是由于在细胞成熟、衰老、死亡时，Caspase3从胞质易位到胞核.　　Nakagawara等［3］在退化凋亡神经母细胞瘤中报道了相似情况，由此推测胞核中的Caspase3可能与细胞凋亡有关，但具体机制不清.实验结果分析还提示，Caspase3在OLP上皮层细胞凋亡中起重要作用；而固有层淋巴细胞的生命活动更为复杂，TNFαTNFRI通路可能不仅仅介导细胞凋亡.

　　肿瘤坏死因子（TNF）是由于其能引起肿瘤组织出血性坏死而得名，TNFα和TNFRI与相关分子结合，激活Caspase3而最终导致靶细胞凋亡［4］.Erdem等［5］检测到OLP患者血清中的TNFα水平明显比正常对照组高，SimarkMattsson等［6］发现OLP的T细胞有TNFαmRNA的表达.本研究结果提示，OLP上皮细胞的凋亡异常可能是通过TNFαTNFRI介导的凋亡通路实现的，OLP固有层中的淋巴细胞表达TNFα，通过结合上皮细胞表面的TNFRI诱导上皮细胞凋亡；OLP固有层淋巴细胞的凋亡可能也是由TNFαTNFRI介导实现的，但是由于TNFRI表达的减少，导致TNFα没有足够的受体结合而不能正常发挥作用，抑制了细胞凋亡，这也说明靶细胞表面TNFRI的质与量直接影响TNFα的敏感性.沈丽佳等［7-8］的研究结果表明，OLP中的上皮细胞和固有层淋巴细胞都是TNFα潜在来源，当OLP中上皮细胞表达TNFα及固有层淋巴细胞表达TNFRI减少时，TNFαTNFRI介导淋巴细胞的凋亡途径受阻，淋巴细胞得以“逃逸”正常的凋亡而聚集于OLP的固有层中.本实验中，OLP固有层淋巴细胞TNFα的表达还与其自身的AI呈负相关，因为TNFα与受体结合后，介导的不止是凋亡通路，还有可能激活NFκB通路，从而产生有利于细胞生存的信号，导致细胞增殖.这也说明了TNFαTNFRI细胞信号传导通路的复杂性，其选择死亡或生存信号的机制有待进一步探讨.

　　本研究中糜烂型OLP固有层淋巴细胞TNFα的表达明显高于非糜烂组，说明TNFα在OLP中除了诱导上皮细胞的凋亡外，还可能通过抑制细胞的生长或通过细胞毒作用，损伤上皮细胞，导致临床上出现上皮萎缩、糜烂等表现.TNFα表达的高低对于OLP临床诊断及治疗的指导意义还有待进一步探讨.

　　［1］NeppelbergE,JohannessenAC,JonssonR.Apoptosisinorallichenplanus［J］.EurJOralSci,2001,109（5）:361-364.

　　［2］HirotaM,ItoT,OkudelaK,etal.Cellproliferationactivityandtheexpressionofcellcycleregulatoryproteinsinorallichenplanus［J］.JOralPatholMed,2002,31（4）:204-212.

　　［3］NakagawaraA,NakamuraY,IkedaH,etal.Highlevelsofexpressionandnuclearlocalizationofinterleukin1betaconvertingenzyme（ICE）andCPP32infavorablehumanneuroblastoma［J］.CancerRes,1997,57（20）:4578-4584.

　　［4］MakTW,YehWC.Signalingforsurvivalandapoptosisintheimmunesystem［J］.ArthritisRes,2002,4（Suppl3）:S243-S252.

　　［5］ErdemMT,GulecAI,KiziltuncA,etal.Increasedserumlevelsoftumornecrosisfactoralphainlichenplanus［J］.Dermatology,2003,207（4）:367-370.

　　［6］SimarkMattssonC,BergenholtzG,JontellM,etal.Distributionofinterleukin2,4,10,tumournecrosisfactoralphaandtransforminggrowthfactorbetamRNAsinorallichenplanus［J］.ArchOralBiol,1999,44（6）:499-507.

　　［7］沈丽佳，阮萍，殷操，等.口腔扁平苔藓中肿瘤坏死因子α和肿瘤坏死因子受体I表达及与细胞凋亡的关系［J］.中国病理生理杂志,2004,20（9）:1664-1667.

　　［8］沈丽佳，阮萍，殷操，等.口腔扁平苔藓中TNFα表达及其与肥大细胞关系的研究［J］.暨南大学学报,2004,25（6）:392-396.