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PCR在骨与关节结核诊断中的应用价值

2009-12-05 www.verylib.com A +

文章内容:疰扁监测1998年第13卷第6期自我省实施(1991―2000年结核病防治规划)以来,逐步在全省范围内采取查,治,管一体化的综舍管理措施,推行以市(县)卫生防疫站(结防专业机构)为主体,将本地区肺结核病倒发现,转诊,报告,登记和化疗管理一系列防治工作纳入统一的管理轨道.遂步完善了鳍接病登记报告制度,到目前为止.全省6%的市,县实现了结核病人的归日管理.通过几年的努力,我省的疫情得到鞍有效的燕翩,病人登记率逐年下降.我誊一直把传染源鼹涂阳病人的发现,治疗篝珲工作放在第一位.狠抓了传染源的发现工作我省通过?系列的措施提高传染源的发现,虹口管理制度的落实及普及.使得结核病人到定点鲔防所《医院)接受检查.疑21查.同时通过大力宣传壹痰的重要性.使传染源的发现工作得到明显的摄高,为结校病疫情的控制与防治奠定了基础.&;全国结核病防治工作手册)要求韧诊病人的查痰率应达到95%以上,新登病人中传染源所占比倒应达一50%.尽管我省这几年的痰检工作有了很大的摄高,但离要求还有一定距离.全省各地(市)的痰幢工作发展很不平衡,部分地(市)的查癜率与拌菌比已达到了全国规定要求,还有为数不少地(市)的查痰率与排菌比低于甚至大大低于垒国规定要求.所以,薄弱地区的痰检工作及提高初诊病人的查痰率仍是今后几年我们应努力抓的工作.(1998年4月,1日惨定)川蚕豫断在骨与关节结核诊断中的应厢价值北京昔舞医科大学附属北索友谊医院(100050)骨与关节结棱击于临床表现多样,甚至手沭看病理世堆以发珊典型酌结核性改燮,使诊变樗更为复杂.一'聚合禽链反缝挣亡箍避年来发袅起来的一种棒辨快建一增按术静催好.徽糠赛鸯,在结楱杆菌树碴澍及结棱瘸的诊新生具脊饭大的虚甩价值'为我们对我院,协上1997"筚收治睁14制_骨与关节结校瘸文及3倒靠缮藏病避行了眦橙耐.并与同胡-2硝骨与关第结旗病人的细蕾培养结果避籽丁比较现榴告姻币...材椒与芳炳制选择:骨与关帮蜡梭4,倒进行检查及2例行结核杆菌培养的病人(2例同时亦行了蝰壹,均为我院住院病王舣人,根据病史,临床表现,线,细茁学及病理学检查确诊骨与关节结核.其它病人35倒西鉴别诊断上的需要貅慨了诘棱杆麓的'检溯,包括非特异性滑膜炎18倒,骨号关帮,较组织诧脓牲感染:0倒,骨性关节病3倒.痛风2例,色素沉着绒毛结节性涪膜_炎1倒.墓性_骨肿瘤例.2标丰收集:有关节积掖或脓肿形成者,可直接穿瓤抽吸,或者取术中肉芽样组织置于无蕾小瓶中送柱,制作石蜡标本.3实验仪器与试剂:扩增仪(美国型),电濠仪(雷.产'一201型).引物舍戚由穰院瘸理科基因诊断中心自行合成,试剂,×苷购自京医科大学基因诊断1中心..,4实验方法:1)提取:关节掖,脓午嘶212?渡及其他渗出液,直接离心沉淀,弃上清,加裂解棱,经过裂解程序后,离心取上清液,反复抽提3次,制怍模板;块状组织.先制作普通病理蜡块.切片后二甲苯脱蜡,梯度乙醇水化,加裂解液,研成乳状.将研后的组织悬液放于玻璃管内煮沸(100℃)20分钟,离心取上清液作模板.2)扩增:反应总体积25(反应液8,模板6与聚合酶").94"1分钟,55℃1分钟,72℃1分钟.循环35次,最后72℃延伸7分钟.3)扩增产物的检铡:取扩增产物0~15#1加澳酚兰3混匀后,于2%琼脂糖凝腔上电泳100,30分钟,然后在紫外线灯下观察,如有'121扩增区带者为阳性,未见121扩增区带者为阴性.每次检测1均设阳性与阴性对照.'4)结核杆菌的分离培养:接中国防痨协会结核病细菌学检壹法标准进行.1_结果1.,卅1骨与关节结榜病人共进行26伏检测,1及6人砍侣牲,病人阳性率78.57%,单次阳性率61.5..35例非结核病人共进行了41次结核杆蔚铡柱潞全臣为阴性...1棚与戋节鳙攘病人细菌觜葬仅3捌盼雎,甩性25%;;:?蓦..'.1附寰一倒!12例墙巷落的比较经统计学处理,搠骨与关节结核经检及2例细菌培养的阳性检出率不同黉;异宥高度显着性(=10.01,&;0.005),法明显优手缉菌培养.单次检铡的阳性率较低,只有61.5%,重复检测则可提高病人的阳性率,达到78.7%..'讨论典型的骨关节结核诊断一般不难,如具有结核中毒症状,伴死骨,脓肿与窦道形成,不伴化脓性炎症的表现,通常可以作出临床诊断.但有时缺乏上述的典型表现,尤其是单纯的滑膜结核,线无特征性,就必须依靠细菌学或病理学检查.结核的细菌学检查很困难,而涂片寻找抗酸杆菌不仅阳性率低.而且也不能定性,细菌培养时茼长,阳性事也不高,很难用于指导早期治疗病理检查只能在术后进行有局限性,而且部分病人在术前接受过长期的抗痨治疗,致使极少教病人病理维织学上也难以找到典型的结核性改变,我院以前就曾遇碧类似的情况,因此需要建立一种敏感,快速而特异的骨关节精核诊断方法.是种.-在体外快速扩增靶片段的技术,灵敏度高,只要有少量,存在却可溢行-复制,数个结核杆菌即可检出,因此被应用于各种结核性疾病的诊断中2】.本文僖者采用这种方法对14例骨关节结核病人及35例非骨关节结核病1人进行维棱基因片段的检测.菇与同期2例绪核瘸的组蘸幢养做了嗽较结果表明,法病人的阳性率(78.5确碉最高蓐培养法.砥农?"确悬一礴番斯骨关节结核韵饕摩方潦蹭,龅捡捌不依赖于细蔷存播榱态菌农厣屎蓦孕_尚隶完垒裂解就1辱精葬法是不可能做到这■点的.驿捡蠢属舞两无即可出结果,因此非常快逮.阿时本襄侔者还对弱例非结棱病1人(包括俐其它细菌!南染病人)进行结核基因验羽'橙测.结果燕捌阳性,说明的特暴件很高.曾有学者_3报告在非结核病人中出现假阳性的情况,但我们认为这主要可能是进检或幢瓣过程中的污染所造成的,而不是方法本身_的问题.但也存在假阴性的情况,如本文结果阳性率78.57%,假阴性则21.3%,遗可能是由以下原因所造成的,操作不规范,破坏了提取的链,标本量太少或送检标本中不含结核杆菌等.因此我们主张重复检验,故对14例结核病人做了26次检测,骨关节结核单次的阳性率6.%,而病人重复检验总的阳性率却高'达78.57%

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