目的研究活血化瘀中药丹参有效单体成分丹参酮IIA对体外培养的兔良性狭窄胆管成纤维细胞增殖、Ⅰ型胶原分泌和基质金属蛋白酶-9mRNA表达的影响,探讨丹参酮IIA治疗良性胆管狭窄的机理,为临床应用中药治疗良性胆管狭窄提供理论的依据。方法钳夹法制作日本大耳白兔良性胆管狭窄模型,于造模后72小时再次无菌手术取出病变的胆管,应用胶原酶消化法联合组织块法分离培养日本大耳白兔胆管成纤维细胞,用含10%胎牛血清的D-MEM培养液进行培养并传代。倒置显微镜下观察成纤维细胞形态。选用第3-5代成纤维细胞随机分为对照组和丹参酮IIA组,应用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测胆管成纤维细胞的增殖及不同浓度（0μg/ml、0.1μg/ml、0.5μg/ml、2.5μg/ml、10μg/ml、25μg/ml）丹参酮IIA溶液在不同时间（24h、48h、72h）对兔胆管成纤维细胞增殖和活力的影响;应用Elisa法检测丹参酮IIA作用48小时后Ⅰ型胶原分泌量的变化,采用RT-PCR方法检测丹参酮IIA对基质金属蛋白酶（MMP）-9mRNA表达的影响。结果（1）钳夹后的胆总管肉眼可见充血、水肿,钳夹痕迹明显,术后三天再开腹时可见胆管组织明显淤血肿胀,近端胆管扩张。胆管与周围组织有轻度粘连,但非常疏松,容易分开;肝脏可见轻度淤胆表现。（2）体外培养的细胞呈长梭形、多角形或不规则形,细胞质透明,显得很薄;细胞核大,椭圆形,颜色淡,通常含2～3个核。（3）MTT法检测丹参酮IIA对兔胆管成纤维细胞增殖的影响:与对照组相比,0.1μg/ml、O.5μg/ml、2.5μg/ml的丹参酮IIA对兔胆管成纤维细胞增殖无明显影响（P>0.05）,丹参酮IIA浓度为10μg/ml时,作用72小时可表现出抑制胆管成纤维细胞增殖（P<0.05）,丹参酮IIA浓度为25μg/ml时,24小时即表现出对兔胆管成纤维细胞增殖明显的的抑制作用（P<0.05）,且随着药物作用时间的延长,抑制作用增强。（4）Elisa法检测丹参酮IIA对兔胆管成纤维细胞分泌Ⅰ型胶原量的影响:与对照组相比,丹参酮IIA组成纤维细胞Ⅰ型胶原分泌水平显著降低（P<0.01）。（5）RT-PCR方法检测丹参酮IIA对基质金属蛋白酶（MMP-9）mRNA表达的影响:与对照组相比,丹参酮IIA能明显诱导MMP-9mRNA的表达（P<0.05）结论（1）钳夹法兔胆管成纤维细胞培养方法是一种优良的获取胆道成纤维细胞的方法。酶消化-组织块联合培养法是一种较好的细胞培养方法。（2）中药丹参有效单体成分丹参酮IIA能够抑制良性狭窄胆管成纤维细胞增殖及胶原的分泌,能诱导MMP-9mRNA的表达而促进胶原降解,从而抑制胆道瘢痕的形成。本文地址：http://lifedoc.cn/yiyaolunwen/200910/24-118109.html
获取全文信息
