单纯疱疹病毒Ⅱ型和人乳头瘤病毒的感染与人工流产术后不孕症的关系

总引物介导的人乳头瘤病毒聚合酶链反应试剂购自中国科学院北京科海医疗生物工程公司，共同引物含有20个碱基，能检测包括HPV6，11，16，18型在内的40余型HPV，扩增DNA片段长度为450bp，引物序列为：5’-CGACCAAGAGGAAACTGATC-3’，5’?GCACAGGGACATAATAATGG?3’。50μl的反应体积中包含：10×缓冲液5μl（50mmol/LkCl，10mmol/LTris-HCl,pH8.3;1.5mmol/LMgCl2）,10mmol/L的dATP,dCTP,dTTP,dGTP各1μl，20μmol/L的引物各1μl,TaqdNA聚合酶1μl（含1.0U），用无菌去离子水补至50μl，加灭菌石蜡油40μl，同时设不加模板的阴性对照和加模板的阳性对照，在DNA扩增仪上（PerkinelmerCetus产品）进行94℃变性1分钟，55℃退火1分钟，72℃延伸1.5分钟，共35个循环。最后一个循环延伸至5分钟。取PCR产物10μl电泳，紫外灯下观察结果。1.4单纯疱疹病毒II型聚合酶链反应试剂购自上海复生生物工程研究所，扩增DNA片段长为372bp，引物序列选自DNA多聚酶编码区，序列为：5’-AAGGAG-GCGCCCAAGCG-3’，5’，-GGTACAGGCTG-GCAAAGT-3’，PCR方法与人乳头瘤病毒检测法相同。2结果2.1不孕组HSV2和HPV的阳性检出结果实验组60例，DNA阳性者48例，阳性率为80.0%，对照组39例，HSV2dNA阳性者10例，阳性率为25.6%，两组比较，具有极显著性差异，χ2=28.7，P＜0.01。实验组HPVDNA的阳性检出率为53.3%（32/60），而对照组的阳性检出率为33.3%（13/39），两组经统计学处理，无显著性差异（χ2=2.78，P＞0.05）。HSV2和HPVdNA的PCR扩增结果见图1。图1PCR产物的琼脂糖凝胶电泳检测结果1∶阳性对照；2∶阴性对照；3～7∶为部分标本Fig.1AgarosegelelectrophoresisofPCRproducts1∶Positivecontrol.2∶Negativecontrol.3-7∶Someofthespecimens2.2实验组与对照组HSV2和HPV混合阳性检出结果见表1。表1不孕组与正常组HSV2和HPV双阳性率的比较Tab.1ComparisonofHSV2andHPVmixedinfectionrateininfertilewomenandthecontrolHSV2/HPV混合感染组别总例数双阳性阳性率（%）GroupNo.testedHSV/HPVMixedinfecbothpositivetionrate实验组602643.3Experimental对照组39923.1Control合计993535.35Total实验组与对照组HSV2和HPV混合阳性分布有显著性差异（χ2=4.24,P＜0.05）。aRignificantdifferenceinpositivityofHSV2+HPVmixedinfectionratewasshownbetweenexperimentalgroupandthecontrols,（χ2=4.24,P＜0.05）2.3HSV2和HPV混合阳性的相关性分析99例标本中，HSV2和HPV混合阳性者35例，占35.4%，表明HSV2和HPV的感染之间有极显著的相关性（χ2=12.5,P＜0.01）。3讨论

有人报道，我国正常人群中HSV2和HPV的感染率分别为20%和31.76%［4,7］，与我们的研究结果相近。这两种性传播病毒与宫颈癌的关系已有报道［8］，但对于它们与不孕症的关系国内外尚未见有报道。我们的结果，从HSV2和HPV在不孕组和对照组的单独感染看，HSV2分别是80.0%和25.6%，有极显著性差异（P＜0.01），HPV是53.3%和33.3%，无显著性差异（P＞0.05）。从两病毒的双重感染看，不孕组HSV2和HPV的混合阳性率为43.3%，而对照组只为9%，有极显著性差异（P＜0.01）。说明这两种病毒的协同作用在不孕症中起着重要作用。在两组共99例病人中，无一例临床诊断为生殖器疱疹或尖税湿疣，说明他们的感染大多呈隐性或潜伏感染。

我们认为人工流产术在一定时间内一定程度上改变了生殖道的生理条件，削弱了局部的防御功能，若术前或术后有HSV2和HPV的隐性感染尤其是两种病毒的混合感染，即可能加速局部的病理损伤，阻碍正常的受孕过程，成为人工流产术后不孕的原因。这两种病毒在生殖道中的相互作用机理仍有待于进一步探讨。值得注意的是，在99份病例中，HSV2和HPV的混合感染阳性率占35.35%，两者的感染有极显著的相关性（χ2=12.5,P＜0.01）。

1MintsL,DrewWL.Sexuallytransmittedviralinfectionsinhomosexualmen.MedClinNorthAm,1983,67:1093.

2NathalieJ,SchimisdtB,RichardW,etal.Diagnosticproceduresforviral,rickettsialandchlamydialinfections.WashingtonDC:APHA,1989:218,850.

3权力敏，王存苗，张南平，等.青岛不同地区不同职业人群中生殖道HSV感染情况的流行病学调查.中华流行病学杂志，1993，14（5）：263.

4郑鹏生，宁杰，李守柔.应用PCR测定正常子宫颈组织HPVDNA的研究，中华妇产科杂志，1994，26（6）：343.

5张觉生.人工流产对今后生育的影响.国外医学.计划生育学分册，1987，（41）：706.

6TrichopouplesD.Reasonforinfertility.BrJObstetGynecol,1976,83:645.

7唐家琪，陶开华，李越希，等.已婚妇女HSV感染的分子流行病学调查.中华流行病学杂志，1993，14（4）：223.

8DasBC,SharmaJK,GopalkrishnaV,etal.DNAsequencesincervicalblothybridizationandPCR.JMedVivol,1992,36（4）:239.