遗传性血管性血友病7例实验诊断和分子发病机制研究

【文　摘】目的：建立系统的血管性血友病（vWD）实验诊断和研究的方法，对7个遗传性vWD家系进行系列的实验诊断和分子发病机制研究。方法：自行建立瑞斯托霉素诱导的血小板凝集试验（RIPA）、血管性血友病因子（vWF）瑞斯托霉素辅因子（vWF：RCo）、vWF抗原（vWF：Ag）、vWF胶原结合试验（vWF：CB）和多聚体分析方法，对vWD患者及家系成员进行测定。采用PCR产物测序以鉴定vWF基因缺陷。采用定点突变、剪接位点分析、序列复杂性分析和核基质结合区评分等生物信息学方法，研究基因突变对蛋白功能的影响。结果：明确诊断vWD患者1型1例．2A型2例，2B型1例，2M型1例及3型2例，其中1型、2M型和2B型vWD为国内首次报道。鉴定到10个基因突变．其中6个为国际上首次发现。体外表达实验显示，R1374S突变引起细胞分泌下降；R1308C突变导致蛋白功能降低：C2327S突变影响多聚体形成。结论：本研究建立的方法和推荐的组合实验适合于绝大多数vWD患者的诊断和分型需要。R1374S、R1308C和C2327S突变分别导致患者出现1型、2B型和2A型vWD表型。插入、缺失和无义突变诱发无义介导的mRNA衰变（NMD），导致vWF合成减少，是本研究中3型患者的发病机制。