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皮肌炎
皮肌炎/多发性肌炎外周血白细胞EB病毒检测
2015-12-30
放心医苑网
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皮肌炎/多发性肌炎外周血白细胞eb病毒检测
中华皮肤科杂志1999年第1期第32卷短篇论著作者：张士发林俊萍王雅坤张欣梁再赋顾绍裘单位：张士发(110015沈阳，沈阳军区总医院皮肤科)；林俊萍王雅坤张欣梁再赋顾绍裘(中国医科大学附属第一临床学院皮肤科)已知eb病毒感染与类风湿性关节炎和sle等自身免疫病的发生有关[1]。为探讨eb病毒与皮肌炎(dm)/多发性肌炎(pm)的关系，我们应用pcr技术对dm/pm患者外周血白细胞中的eb病毒进行了检测，现报道如下。一、资料和方法(一)病例：dm和pm共40例，男8例，女32例；年龄18～65岁，平均39.61±12.86岁。其中dm18例，pm22例。均符合bohan等[2]的诊断标准，且均无并发恶性肿瘤。正常对照组选自健康志愿者40例，年龄和性别与患者组匹配。(二)试剂：采用上海复生生物工程研究所生产的pcr检测eb病毒试剂盒，成分：eb病毒-pcr反应液(含4种脱氧核苷三磷酸及标准pcr缓冲液)，taq酶(1μl/μl)，eb病毒-dna裂解液，eb病毒阳性模板。(三)方法：1.标本处理：肝素抗凝血200μl，加1ml0.83％nh4cl，37℃水浴20min，8000r/min3min离心，弃上清液及压积于白细胞表面的红细胞碎片，并尽量吸去。在得到的白细胞中加入40μl裂解液和2μl(10mg/ml)蛋白酶k，搅匀后45℃水浴1h，稍加离心，100℃水浴5min，10000r/min2min离心，取上清液待检。2.加样及pcr扩增：加eb病毒-pcr反应液20μl、taq酶1μl(1u/μl)、阳性模板/待检样本3μl，混匀后稍加离心，滴2滴消毒液体石蜡油，置94℃预变性2min，再94℃30s、55℃30s、72℃60s扩增35个循环。3.电泳与结果判定：取15μl反应液，2％琼脂糖凝胶电泳(5v/cm)30min后，紫外灯下观察结果。若在154bp处出现橙黄色条带，则为eb病毒阳性。4.统计分析：χ2检验。二、结果40例dm/pm中eb病毒阳性者16例，阳性率为40％；18例dm中eb病毒阳性者8例，阳性率为44％；22例pm中eb病毒阳性者8例，阳性率为36％。40例对照组中eb病毒阳性者3例，阳性率7.5％。统计分析表明，dm/pm与对照组比较，χ2=11.66,p＜0.01；dm与pm比较，χ2=0.27,p＞0.05；dm与对照组比较，χ2=11.02,p＜0.01；pm与对照组比较，χ2=8.10,p＜0.01。三、讨论dm/pm是一种自身免疫性疾病，其外周血中存在多种自身抗体，如抗jo-1抗体等。研究表明，eb病毒在体外与dm外周血b淋巴细胞作用后，b淋巴细胞在短时间内即可合成和分泌大量的抗体，包括抗核抗体等[3]。本研究表明，dm和pm的eb病毒感染率显著高于正常对照组，表明eb病毒感染可能与dm/pm中b淋巴细胞活化、增殖、转化和自身抗体产生有关，即可能是dm/pm的发病诱因。另外，也不排除由于dm/pm自身免疫功能紊乱，从而有利于eb病毒感染或携带，导致eb病毒高感染率。目前尚无定论，有待进一步研究。参考文献[1]petersenj,rhodesg,roudierj,etal.alteredimmuneresponsetoglycinerichsequencesofepstein-barrnuclearantigen-1inpatientswithrheumatoidarthritisandsystemiclupuserythematosus.arthritisrheum,1990,33:993-1000.[2]bohana,peterjb.polymyositisanddermatomyositis.nengljmed,1975,292:403-407.[3]李文全,畅继武.皮肌炎患者b淋巴细胞分泌免疫球蛋白的检测.中华皮肤科杂志,1994,27:364-365.(收稿：1997－12－01修回：1998－03－16)（责任编辑：jbwq）
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