首页>疾病百科> 孢子丝菌病

孢子丝菌病的药物研究

2009-07-14 家庭健康 A +

  临床资料:自1988~1996年临床诊为孢子丝菌病的患儿46例。其中男27例,女19例;白城地区28例,内蒙地区10例,长春地区8例;年龄最小3个月,最大14岁;病程最短2周,最长6年,平均病期为4个月;分型以固定型居多为32例,淋巴管型10例,皮肤播散型4例;发病部位以面部最多共43例,其中眼睑发病6例,四肢发病仅3例。皮损特点为炎性肉芽肿及皮下结节,其中1例为两次冷冻治疗复发的疣状增生。病例确诊依据为孢子丝菌素皮试、真菌培养及病理组织切片HE及PAS染色,临床特征及治疗效果综合判断。临床工作中遇有皮损似孢子丝菌病患儿,孢子丝菌素皮试阴性,病理组织切片排除孢子丝菌病患儿5例,形成自然对照组。皮肤癣菌病患儿20例,健康儿童30例。

  孢子丝菌素的制备:

  (1)取我科真菌室保存的申克孢子丝菌菌种,无菌操作下划线法接种于8只250 ml茄瓶沙斜面培养基上,20℃培养2周,长出较厚菌膜用丙酮冲洗,2 h后吹干,获灭活的孢子丝菌干粉。参照真菌抗原提取法,取5 g干粉加入250 ml柯卡提取液中,电动玻璃匀浆机研磨(8 000 r/min) 30 min,4℃磁力搅拌器提取72 h,孢子丝菌充分吸收后过滤,滤液透析24 h,校正pH为7.5,负压蔡氏滤器(0.2 μm)过滤除菌,获2倍稀释的孢子丝菌素制剂,4℃冰箱保存备用。

  (2)无菌测定:无菌操作下抽取上述抗原液分别接种于肉汤培养基及沙氏培养基上,20℃培养2周,观察无细菌及真菌生长。

  (3)毒力试验:取10只20 g体重的雄性小白鼠,5只每只腹腔内注入抗原液0.5 ml,另5只每只腹腔内注入生理盐水0.5 ml,喂养2周,小鼠生长良好,二组间无差异。

  (4)抗原效价测定:应用Lowry法测定2倍稀释抗原液,采用岛津UV-190型分光光度计测定750 nm的吸光度值,作标准曲线经换算得蛋白含量为60 μg/ml。

  (5)抗原液的最后稀释浓度为1∶100,1 ml/g分装后4℃冰箱保存备用。

  皮试及结果制定:

  (1)于前臂内侧皮内注射孢子丝菌素0.1 ml,48 h观察结果。

  (2)制定标准:阴性:与溶媒对照类似的帽针大小丘疹或红晕。

  可疑:直径小于0.5 cm的水肿性红斑。结果:46例中,孢子丝菌素皮试,真菌培养及病理检查皆做者共21例,不宜作病理检查者25例,孢子丝菌素皮试阳性者共45例,阳性率98%,真菌培养阳性者43例,病理检查为炎性肉芽肿;自然对照组、皮肤癣菌病20例、正常儿童30例皮试结果均阴性。全部确诊病例均予10%碘化钾溶液5~10 ml,每日3次口服,经2~4个月治愈,随访半年以上无复发。

  讨论:孢子丝菌病是由申克孢子丝菌引起的慢性深部真菌病。主要侵犯皮肤及皮下组织,且可侵犯内脏器官。

  目前诊断该病常用的方法有:皮损渗出液涂片Gram及PAS染色镜检,直接镜检检出率低,据统计国内自1947~1996年已公开发表的1 647例该病患者中做直接镜检(需取组织块或患处脓液)费时长,至少需1~2周;而儿童患者有相当部分病例(占54.3%)不宜作病理检查。孢子丝菌素皮试快速、简便更适于儿童患者应用。

  孢子丝菌素的制备已经历了四个阶段:

  (1)标准的孢子丝菌素(相当于菌苗制备);

  (2)液体培养滤液;

  (3)多糖衍生物的粗制剂;

  (4)多肽抗原制剂。

  本组即经历了第3阶段,一般认为人体感染申克孢子丝菌后5~15 d即可出现皮试阳性反应。因申克孢子的菌与白色念珠菌有相同的抗原决定簇,其相关系数为0.89%,故用白色念珠菌吸收孢子丝菌素,从而有效地清除了二者间的交叉抗原性,故此孢子丝菌素具有高特异性,全部确诊病例皆通过各种手段,相互验证,结果可靠。故认为此方法可作为诊断儿童孢子丝菌病的首选方法之一。

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