中药肾乐方对微小病变肾病大鼠血清、肾组织内皮素干预作用的研究

【摘要】目的进一步探讨中药肾乐方的肾脏保护作用机制。方法将48只SD大鼠适应性喂养1周后，随机分为6组：正常组、模型对照组、强的松组、中药低、中、高剂量组（中药肾乐方治疗）。采用表柔比星尾静脉注射法复制微小病变肾病（MCNS）大鼠模型，分别给予不同剂量肾乐方药液、强的松混悬液。测定大鼠24h尿蛋白定量、血清白蛋白、总胆固醇、三酰甘油、尿素氮、肌酐、血清及肾组织内皮素（ET）的水平，并进行电镜下肾脏组织形态学观察。结果与正常组比较，模型对照组血清、肾组织ET质量浓度均有不同程度增高（P<0.05～0.01）。肾乐方可减少MCNS大鼠尿蛋白的排泄量，改善血清生化指标，降低血清及肾组织ET质量浓度（P<0.05～0.01），修复肾小球上皮细胞足突的结构。结论MCNS大鼠ET质量浓度升高，肾乐方对MCNS大鼠有明显疗效，并能抑制其增高的ET表达，从而减轻肾脏病理损害，缓解肾病。

【关键词】肾变病综合征/药物疗法;内皮素;肾乐方/治疗应用;中草药;动物，实验

　　【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheeffectsofShenlefanginMCNSrats.MethodsAtotalof48MCNSmodelratswereinducedbyADRvenoclysisthroughcaudalvein.Theratswererandomlydividedintosixgroups:thenormalcontrolgroup,themodelcontrolgroup,thepositivecontrolgroup,thelowdosageofChineseherbsgroup,themiddledosageofChineseherbsgroup,thehighdosageofChineseherbsgroup.Differenttreatmentweregiventothesixgroups.Weobservedtheamountofproteininurine,determinedthelevelsofAlb，TC，TG，BUN，ScrandETinserumandETinkidney,andobservedmorphologicchangeinkidneys.ResultsComparedwiththenormalgroup,thelevelsofETinserumandkidneytissueofratsinthemodelgroupswereincreased（P<0.05～0.01）.ShenlefangcoulddecreasetheamountofproteininurineandtheTC，TG，BUN，ScrandETinserumorkidney（P<0.05～0.01）,andrepairinjuredfootprocessofglomeruleepithelialcell.ConclusionETmaybeconcernedwiththepathogenesisofMCNS.ShenlefanghasobviousprotectiveeffectonMCNSrats,inhibittheETexpressioninserumandkidney,andpreventthefurtherdevelopmentofMCNS，hencereducethepathologicdamagetokidneyandalleviatekidneydisease.

　　【Keywords】Nephroticsyndrome/medicinaltherapy;Endothelin（ET）;Shenlefang/treatmentapplication;Chineseherbs;Animal,experiment

　　微小病变肾病（Minimalchangenephroticsyndrome，MCNS）是小儿原发性肾病综合征的常见病理类型，属中医学“水肿”范畴。肾乐方系浙江省著名中医儿科专家马莲湘教授治疗小儿原发性肾病综合征的经验方，经多年临床使用，疗效显著。前期研究表明，肾乐方对肾病综合征大鼠有明显疗效，可抑制重要介质白细胞介素（IL）8和肿瘤坏死因子（TNF）α的分泌，改善其免疫功能[1]。为进一步探讨肾乐方的作用机制，本研究应用典型的MCNS动物模型，进行中药治疗，观察肾乐方对大鼠血清及肾组织内皮素（ET）表达的影响，初步探讨其肾脏保护作用机制，现报道如下。

　　1材料与方法

　　1.1动物与药物同批清洁级健康雄性SD大鼠48只由浙江中医药大学实验动物中心提供，动物实验合格证：SYXK（浙）20030003，体质量（180±10）g。中药肾乐方（生黄芪、生地、白茅根、白花蛇舌草、水蛭、丹参等）煎煮后，过滤浓缩为低、中、高3种剂量溶液（生药质量浓度分别为1，2，4g/mL）。强的松片（浙江仙居制药有限公司，批号：051111），每片5mg，用蒸馏水配制成2g/L的混悬液。注射用盐酸表柔比星（浙江海正药业有限公司，批号：060105），每瓶10mg，用生理盐水配制成2g/mL的溶液。

　　1.2试剂和仪器ET试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号：060516）。BECKMAN型离心式全自动生化仪（美国实验仪器公司），722分光光度仪（美国PACKARO公司）。

　　1.3方法

　　1.3.1模型制作所有大鼠实验前24h尿蛋白定量均正常。适应性喂养1周后，按简单随机化原则分为6组：正常组、模型对照组、强的松组和中药低、中、高剂量组，每组8只。除正常组大鼠经尾静脉1次性注射等量生理盐水外，其余各组参照文献[2]造模：经大鼠尾静脉一次性注射2g/mL表柔比星溶液（剂量6mg/kg）。

　　1.3.2分组给药自造模当日起，观察组大鼠分别给予不同剂量肾乐方中药液、强的松混悬液，正常组、模型对照组给予等量生理盐水作为安慰对照，灌胃量10mL/（kg・d）。每日1次，连续给药4周。

　　1.3.3指标测定实验第7，14，21，28天分别置大鼠于代谢笼中，留取24h尿量，用比色法测定大鼠24h尿蛋白定量。给药结束后第2天，各组大鼠麻醉后摘眼球取3mL血两管，分离血清，一试管采用全自动生化仪测定血清白蛋白（Alb）、总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、尿素氮（BUN）、肌酐（SCr）水平;以放射免疫法测定另一试管血清及肾脏组织上清液ET的质量浓度，严格按试剂盒说明操作。处死大鼠，无菌操作摘取左肾，去包膜，取100mg肾组织加0.9mL生理盐水，匀浆，10000r/min离心10min，取上清液。肾皮质部位取材，以2.5%戊二醛溶液固定，超薄切片，染色后行电镜下肾脏组织超微结构观察。

　　1.4统计学分析采用SPSS10.0统计软件，计量数据以±s表示，组间差异的比较采用单因素方差分析，显著性水准为P<0.05。