前列环素与门静脉高压症高动力循环的关系

前列环素与门静脉高压症高动力循环的关系hc360慧聪网医疗器械行业频道2003-09-2415:01:36
[摘要]目的探讨前列环素（PGl2）和一氧化氮（NO）在门静脉高压症高血流动力循环中的作用。
方法66只雄性SD大鼠随机分成于内型门静脉高压症组<IHPH组]、肝前型门静脉高压症组（PHPH组）和假手术组（SO组）。模型制备1周后再随机分为3个亚组，即对照组、一氧化氮合酶抑制剂L-NNA组、消炎痛组。用药1周后测定股动脉血浆6-酮-前列腺素F1。（6-keto-PGFla。）和N02-／NO2-浓度，应用同位素微球技术行血流动力学研究，并对NO、PGl2水平与血流动力学参数行Pearson相关分析。
结果（1）在基础状态下，血浆6-keto-PGFla。浓度，IHPH鼠[（1123.85土153.64）pg]和PHPH鼠[（891.58±83.11）pg／m1]均显著地高于So鼠[（725.53±105.54）pg/ml]，p<0.05；血浆N02-／N03-浓度，IHPH鼠[（73.34±4.31）~moVL]和PHPH鼠[（75.21±6.89）umol／L]均显著高于SO鼠[（58.79±8.47）umol／L]，p<0.05。（2）与对照组比较，LNNA与消炎痛均显著地降低IHPH与PHPH2组鼠血浆6-keto-PGFla和N02-／NOs-的浓度，p<0.05；降低IHPH、PHPH2组鼠的心脏指数（C1）、门静脉压力（PPP）和门静脉血流量（PVl），p<0.05；显著地增高这2组鼠的平均动脉压（MAP）、总外周血管阻力（TPR）和内脏血管阻力（SVR），p<0.05。（3）扣除NO的影响后，血浆PGl2水平与CI、TPR、PVI及SVR等血流动力学参数无显著性相关；而扣除PGl2的影响后，血浆NO水平与全身及内脏血流动力学参数仍呈显著性相关。
结论门静脉高压症高动力循环的主要发病因子是NO而不是PGl2。

一氧化氮（NO）是门静脉高压症高动力循环的介质已获一致结论，但前列环素（prostacyclin，PGl2）是否为高动力循环的介质却有不同结果。为了明确PGl2在门静脉高压症高动力循环中是否起作用，研究一氧化氮合酶（nitricoxidesynthase，NOS）抑制剂与环氧化酶（COX）抑制剂对门静脉高压症鼠血流动力学和血浆NO、PGl2水平的影响，探讨在高血流动力学的发生和维持中NO和PGI2所起的作用以及两者之间可能存在的相互关系。

材料与方法
一、动物模型制备
1.实验动物：66只雄性SD大鼠，体重（300±50）g，饲养在恒温的动物房中（25℃左右），12h光照和12h黑暗交替，自由进食标准颗粒饲料及饮水。实验动物随机分成3组：肝内型门静脉高压症组（1HPH组）、肝前型门静脉高压症组（PHPH组）和假手术组（S0组）。
2.IHPH制备：60％的CCl4油溶液0.3ml／100gBW肌肉注射（首次为0.5mL／100gBW），每4天1次。共注射15次。同时饮10％乙醇。
3.PHPH制备：在开放乙醚麻醉、清洁的条件下进腹，分离门静脉主干，7号钝头针并置于门静脉后，在胃冠状静脉上方一同结扎，然后除去钝头针，形成门静脉缩窄程度一致的肝前型门静脉高压症。
4.So制备：乙醚麻醉下进腹，游离门静脉和下腔静脉，约等10min后关腹。

二、实验方案
动物模型制备后1周，IHPH组、PHPH组与S0组鼠再随机分成3个亚组，即生理盐水对照组、NOS抑制剂L-NNA组（3.3mg・kg-1．d-1胃管内注入）及消炎痛组（5mg・kg-1．d-1胃管内注入）。
1.血流动力学测定：动物模型用药1周后，用同位素微球技术行血流动力学研究并计算血流动力学参数，包括平均动脉压（MAP）、门静脉压力（PPP）、心脏指数（C1）、总外周血管阻力（TPR）、门静脉血流量（PⅥ）、内脏血管阻力（SVR）。
2.血浆6-酮-前列腺素Fl。（6-keto-PGFl。）浓度测定：大鼠处死前即同位素微球注入后10min取股动脉血1.5ml，4咒离心，3500r／min，15min，分离血浆，-20℃保存至测定。用6-keto-PGFl。放免药盒（解放军总医院免疫技术研究所产品）测定。
3.血浆NO2-／NO2-浓度测定：大鼠处死前即同位素微球注入后10min取股动脉血1.5ml，肝素化后即以4℃离心，1500r／min，30min，分离血浆，-20℃保存至测定。用NO测试盒（南京建成生物研究所产品）测定。该法测得的结果是NO，-与NO2-之和。

三、统计学方法
数据用SAS软件包处理。在同一动物模型不同组间及3种动物模型间比较用单因素方差分析，然后用Duncan方法进行各水平间的两两比较。对于特定变量的相关性分析用Pearson偏相关分析。统计学显著性水平定为a=0.05。

结果
1.NOS及COX抑制剂对鼠血浆PGl2、NO水平的影响：IHPH与PHPH2组鼠血浆6-keto-PGFl。的浓度与血浆NO2-／NO3-的浓度均显著高于So组鼠（p<0.05）。与对照组比较，L-NNA与消炎痛均显著地降低IHPH与PHPH2组鼠血浆6-keto-PGFl。和NO2-／NO3-的浓度（p<0.05）。
2.NOS及COX抑制剂对鼠全身血流动力学的影响：基础状态下，与SO鼠比较，MAP与TPR在IHPH、PHPH2组鼠中均显著地降低（p<0.05），而CI在IHPH组、PHPH组鼠中均显著地增高（p<0.05）。与对照组比较，L-NNA与消炎痛均显著地降低IHPH组、PHPH组鼠的CI（p<0.05），并显著地增高这2组鼠的MAP和TPR（p<0.05）。消炎痛没有引起SO组鼠瓤和TPR的显著变化。
3.NOS、COX抑制剂对鼠内脏血流动力学的影响：基础状态下，与So组鼠比较，IHPH组、PHPH组2组鼠的FPP和PVI均显著的升高（p<0.05），而SVR显著降低（p<0.05）。与对照组比较，L-NNA
与消炎痛均显著地降低IHPH组、PHPH组与So组3组鼠的PVI（P<0.05）,2种药物均显著地增高IHPH组,PHPH组与SO组鼠的SVR（P<0.05）
4.相关性分析：血浆6-keto-PGFla。浓度与血浆N02-／NO3-浓度呈显著性正相关（r=0.3939，p<0.01）,扣除NO水平的影响后，血浆6-keto-PGFla。浓度与CI、TPR、PVI及SVR等血流动力学参数并无显著性相关；然而，扣除血浆PGI：水平的影响后，NO水平与全身及内脏血流动力学参数仍呈显著性相关。

讨论
关于PGl2是否参与门静脉高压症高动力循环的形成，尚未被广泛的研究所证实。Hamalton等[1]研究发现，在门静脉部分缩窄所致门静脉高压症鼠血中PGl2稳定水解产物6-keto-PGFl。的含量显著升高，并与门静脉压力呈正相关。Sitzmann等[2]发现在门静脉高压症动物模型中发现脾髓压（PVP）的升高、肠系膜动脉血流量（SMAF）的增加及其阻力的下降与体循环动脉血中PGl2水平密切相关，用COX抑制剂消炎痛处理后高动力循环状态明显改善，在输入外源性PGI2后可逆转消炎痛所产生的效应，从而推测PGl2可能通过门体分流逃逸肝脏降解而作为一种体循环激素参与高动力循环的形成。随后在肝硬化门静脉高压症及Budd-Chiari综合征病人中也发现PGl2与门静脉压力呈正相关，进一步支持上述推断。Hou等在肝前型门静脉高压症鼠的
肠系膜上动脉及胸主动脉中COX-1mRNA的转录都有不同程度的增加，这似乎也支持PGl2在全身及内脏的高血流动力学的发生、发展中起一定的作用。
但是，Blanchart等用消炎痛处理门静脉高压症鼠并未发现其善高动力循环的效应，并认为在门静脉部分缩窄所致门静脉高压动物模型中侧支循环的建立是为了适应门静脉高压而被动扩张。我们过去的研究结果显示在基础状态时全身和内脏高血流动力学和门体分流的程度是门腔分流鼠（PCS）>PHPH>IHPH，而6-keto-PGFla。的浓度是PHPH>IHPH>PCS，且PCS鼠的浓度虽较SO高，但显著地低于PHPH和IHPH鼠，即PCS鼠高血流动力学的程度最重，但PGI：升高最少[5]。在静脉应用NOS抑制剂后，PCS、PHPH和IHPH3组鼠高血流动力学状态被逆转到SO鼠的基础状态水平的同时PGI：水平反而升高，特别是PCS和SO鼠的升高极为明显，非常显著地高于基础状态时的PGl2水平，而与PHPH和IHPH鼠比较，差异无统计学意义。同时我们发现，IHPH鼠原位肝移植术后3、7d时PGI2显著地低于IHPH鼠，但术后3d时的PGI：仍较正常对照鼠高，同时门静脉压力也较正常对照鼠升高，术后7d时PGI：与正常对照鼠比较无明显差异，IHPH原位肝移植后3、7d时高血流动力学状态依然存在，再次证实门静脉压力升高使PGl2升高，PGl2并不是门静脉高压症高血流动力学的发病因子[6.7]。最近的资料表明，在活体PGI：并不能cNOS去除的小鼠血管张力力调节到正常水平。
本研究显示，IHPH与PHPH鼠均具有心输出量和内脏血流量增加，平均动脉压、周围血管阻力和内脏血管阻力降低等高血流动力学特征，同时L-NNA与消炎痛均显著地降低门静脉高压症鼠的心输出量、内脏器官的血流量，增加外周及内脏血管阻力从而改善高动力循环状态，似乎NO与PGl2均为高动力循环状态的介质。然而Hardy等研究发现，消炎痛在抑制PGI：合成的同时还可抑制NO的释放，这与我们在本研究中的结果相一致，即消炎痛在显著降低IHPH组和PHPH2组鼠血浆PGl2水平的同时也显著地降低两组鼠血浆NO的水平。在进一步对NO与PGI：水平与血流动力学参数行Pearson偏相关分析后发现，扣除NO的影响后，PGl2与CI、TPR、PVI及SVR等血流动力学参数并无显著性相关；而扣除PGl2的影响后，NO与全身及内脏血流动力学参数仍呈显著性相关，提示消炎痛改善PHPH鼠高动力循环状态是通过抑制NO的释放所致。

因此，门静脉高压症高动力循环的介质是NO而不是PGl2。我们还发现，大剂量肝素在缓解门静脉高压症高动力循环状态的同时血浆NO水平显著降低，而PGl2水平显著地升高，更进一步证明了门静脉高压症高动力循环的发病因子是NO而不是PGl2。
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