关键词：促凋亡基因bax骨巨细胞瘤表达 摘要 目的：研究促凋亡基因bax在骨巨细胞瘤中的表达及其与Jaffe分级和预后的关系。方法：采用兔抗人Bax多克隆抗体及免疫组织化学SABC法。结果：73例骨巨细胞瘤中，Bax阳性47例（64.4％）；其中Jaffe病理分级Ⅰ级27例中，阳性22例（81.5％），Ⅱ级38例中阳性23例（60.5％），Ⅲ级8例中2例阳性（25.0％），P＜0.05。在不同预后分组中Bax阳性率间无显著差异0.05）。结论：促凋亡基因在骨巨细胞瘤中不同程度的表达可能参与骨巨细胞瘤凋亡的调节，并与肿瘤分化程度有关。单一Bax表达不能反应预后。 关键词：凋亡bax骨巨细胞瘤免疫组织化学 众所周知，细胞凋亡调控失常会导致肿瘤的发生。bax是目前白细胞基因文库中发现的一种新基因，其转录产物Bax可与bcl－2蛋白形成异源二聚体，具有抑制bcl－2功能，促进细胞凋亡的作用[1]。 骨巨细胞瘤是最常见的原发性骨肿瘤之一，国人发生率是欧美的三倍[2,3]。该肿瘤介于良恶性之间，但局部侵袭性强，部分良性骨巨细胞瘤可发生远处转移[4]。常规手术治疗复发率高。因此，对骨巨细胞瘤凋亡调控的研究对了解其生物学特性具有重要意义。本文应用免疫组织化学方法，对Bax在骨巨细胞瘤中细胞定位及在不同病理分级和不同预后的瘤组织中的阳性表达率进行了观察。 1 材料与方法 1.1 标本 73例骨巨细胞瘤标本均来自我科的手术标本，其中胫骨上端29例，股骨下端26例，股骨上端6例，肱骨上端7例，桡骨远端3例，胫骨远端1例，髌骨1例。病人皆随访4年以上，手术方式均为病灶刮除＋50％氯化锌烧灼瘤腔壁＋植骨。其中治愈41例，复发26例，转移6例。按Jaffe病理分级标准，Ⅰ级27例，Ⅱ级38例，Ⅲ级8例。标本经10％福尔马林固定，石蜡包埋，5μm连续切片，贴于经APES处理的载玻片上，进行免疫组化染色。 1.2 染色方法 将切片行HE染色，另一套切片行免疫组织化学染色，采用链霉亲和素－生物素－过氧化物酶法促凋亡基因bax在骨巨细胞瘤中的表达及意义（SABC法）。兔抗人Bax多克隆抗体购自SantaCruzaBiotechnology,Inc,SABCKit购自武汉博士德公司。按说明书方法染色，Bax稀释度为1:150，标本不经抗原修复，设空白对照及正常兔血清（1:50）替代一抗的替代对照。 1.3 结果评定 标本无阳性细胞、阳性细胞率＜10％或背景同空白对照者为阴性；标本阳性细胞呈淡棕黄色或阳性细胞率介于10％～50％为弱阳性（＋）；标本阳性细胞呈深棕黄色且阳性细胞率＞50％为强阳性（＋＋）。HE染色切片均经两位有经验的病理医生行Jaffe分级标准分级。 1.4 统计学方法 按Jaffe病理分级为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级，分别统计阳性率。按不同预后分组随访4年以上无复发或转移者为治愈组，有复发无转移者为复发组，伴转移者为转移组，分组统计阳性率。率的比较用χ2检验，P＜0.05为统计学有意义。 2 结果 bax阳性物质呈棕黄色颗粒状，主要位于骨巨细胞瘤中多核巨细胞和单核基质细胞的胞浆中（附图）。73例骨巨细胞瘤标本中bax阳性共47例，阳性率64.4％。按Jaffe病理分级，Ⅰ级27例中22例阳性，其中，＋＋16例，＋6例，阳性率81.5％；Ⅱ级38例中23例阳性，其中，＋＋9例，＋14例，阳性率占60.5％；Ⅲ级8例中2例阳性，均为＋，占25.0％。三组阳性率有显著差异（P＜0.05）。按治疗效果分组治愈组41例中26例阳性（63.4％），复发组26例中17例阳性（65.4％），转移组6例中4例阳性（66.7％），三组间阳性率无显著差异（P＞0.05）。 3 讨论 bax基因于1993年克隆成功，其编码蛋白是21kb的baxα和24kb的baxβ，与bcl－2蛋白有21％的氨基酸序列同源。Bax可与bcl－2蛋白结合形成异源二聚体，抑制bcl－2的功能，促进细胞凋亡[1]。在73例骨巨细胞瘤中，47例（64.4％）Bax呈阳性反应，阳性物质分布于骨巨细胞瘤单核基质细胞和多核巨细胞的胞浆中。按Jaffe病理分级Ⅰ级阳性率为81.5％；Ⅱ级为60.5％；Ⅲ级为25.0％，三组标本bax阳性率有显著差异（P＜0.05）。而且Ⅰ级中以强阳性为主，Ⅲ级中则均为弱阳性，说明bax在骨巨细胞瘤高、中、低分化的瘤细胞凋亡调控中的作用不同。Ⅰ级骨巨细胞瘤分化较好，bax表达最高，而在低分化的Ⅲ级骨巨细胞瘤中，bax表达低，说明bax的表达量与肿瘤的分化程度有关。骨巨细胞瘤是介于良恶性之间的肿瘤，但其生物学行为特殊。传统认为属于良性肿瘤的JaffeⅠ级和Ⅱ级病例，4％的患者发生恶变，2％～3％的患者发生远隔转移[4,5]，因而其预后难以判断。骨巨细胞瘤的预后受其治疗方式、肿瘤浸润范围、肿瘤分化程度、肿瘤的增生与凋亡多因素的影响。本文73例中，治愈组、复发组、转移组组间阳性率无显著差异（P＞0.05）。本研究虽表明bax参与了部分骨巨细胞瘤的凋亡调控，与分化有关，但单一bax表达不能反映其预后，因而尚需结合其它相关基因及其增殖指标作进一步研究。 参考文献 1OltivaiAN,MillimanCL,KorsmeyerSJ.bcl－2Heterodimerizesinvivowithaconservedhemology,Bax,thatacceleratesprogrammedcelldeath.Cell,1993;74（4）:609 2SungHW,KuoDP,ShuWP,etal.Giant－celltumorofbone:AnalysisoftwohundredandeightcasesinChinesepatients.JBoneJointSurg（Am）,1982;64:755 3Ortiz－CruzEJ,QuinnRH,FanburgJC,etal.Latedevelopmentofamalignantfibroushistocytomaatthesiteofagiantcelltumor.ClinOrthop,1995;318:199 4LadanyiM,TraganosF,HuvosAG.Benignmetastasizinggiantcelltumorsofbone:ADNAflowcytometricstudy.Cancer,1989;64（10）:1521 5RockMG,PritchardDJ,UnniKK.Metastasesfromhistologicallybenigngiant－celltumorofbone.JBoneJointSurg（Am）,1984;66:269[来源:778论文在线qiqi8.cn]
