利用消减抑制杂交筛选瘢痕疙瘩差异表达基因

成果摘要：
目的：利用抑制消减杂交（suppressionsubtractivehybridization，SSH）技术，比较瘢痕疙瘩与正常皮肤组织之间基因表达差异，筛选瘢痕疙瘩特有的差异表达基因片段，为揭示瘢痕疙瘩的病因提供实验依据。　　　　方法：提取瘢痕疙瘩与正常皮肤组织细胞mRNA，逆转录成cDNA。以瘢痕疙瘩cDNA为检测子，正常皮肤组织细胞cDNA为驱动子，选择四碱基内切酶RsaⅠ将cDNA酶切；连接特殊设计的接头进行消减杂交和PCR反应，得到消减混合物，与T载体连接，转化DH5α感受态细菌，建立差异消减文库。Southern杂交筛选鉴定差异基因，进行测序和同源分析。　　　结果：经SSH筛选、Southern杂交鉴定得到13个瘢痕疙瘩差异表达基因，其中已知功能的基因11个，如TA结合因子1、E4基因转录因子1、ephrinB2型受体基因、血小板生长因子受体基因等；有与肿瘤发生有关的基因，如G抗原7基因等；未知功能基因2个。　　　结论：筛选得到的瘢痕疙瘩差异表达基因，对了解瘢痕疙瘩发生发展的病因学基础和指导临床治疗具有重要意义。