小鼠沙眼衣原体肺炎的诱生及检测

关键词小鼠沙眼衣原体肺炎

摘要目的探讨沙眼衣原体小鼠肺炎感染模型的建立及检测。方法用沙眼衣原体小鼠肺炎株鼻腔吸入感染C57BL/6小鼠。用过氧化物酶连接的鼠抗衣原体脂多糖单抗染色及RT-PCR，检测衣原体在小鼠肺组织的生长;通过肺组织髓过氧化物酶检测，确定肺炎症细胞类型。结果一定剂量的衣原体MoPn经鼻腔吸入可引起小鼠衣原体肺炎，以肺组织衣原体生长及肺组织大量中性粒细胞浸润为特征。结论小鼠可作为研究沙眼衣原体肺炎有价值的动物模型。关键词沙眼衣原体小鼠肺炎髓过氧化物酶

EstablishmentanddetectiontoChlamydiatrachomatispneumonitisofthemouseAbstractObjectiveToestablishamousemodelofChlamydiatrachomatispneumonitisandinvestigatethedetectivemethod.MethodsPneumonitiswasproducedbyintranasalinoculationofChlamydiatrachomatismousepneu-monitisbiovarinC57BL/6mice.ChlamydiagrowthinthelungsweredeterminedbychlamydiainfectivityandchlamydiamRNAexpressioninthelungs.Lunginflammatorycelltypewasdeterminedbylungmyeloperoxidaseassay.TheinfectionwasconfirmedbyinoculatingHela229cellmonolayerwithlunghomogenatesfollowedbyHRPconjugateanti-ChlamydiaLPSmAb.ResultsIntranasallyinfectedwithC.trachomatisMoPninmiceresultedinChlamydiamousepneumonitisfeaturedbychlamydiagrowthandmassiveinfiltrationofneutrophilsinthelung.ConclusionMicemayserveasausefulanimalmodelforthestudyoftheChlamydiatrachomatispneumonitis.KeywordsChlamydiatrachomatismousepneumonitismyeloperoxidase沙眼衣原体小鼠肺炎菌株是小鼠肺炎的天然病原体，最初是从小鼠肺组织分离得到的，所以MoPn感染的小鼠模型最常用于研究衣原体体内感染。本研究以MoPn通过呼吸道感染易感小鼠，并通过检测衣原体在肺组织中的生长及肺组织炎症细胞的浸润，对小鼠衣原体肺炎进行检测和鉴定。

1材料与方法1.1沙眼衣原体菌株MoPn生长于HeLa229细胞，用不连续密度梯度离心法纯化衣原体，进行活性测定后用于感染小鼠。1.2感染小鼠6～8周龄雌性C57BL/6小鼠，在微麻状态下鼻腔内吸入40μl含1×103包涵体形成单位的MoPn。1.3肺组织上清液中衣原体活性测定无菌采集小鼠肺组织右叶，制备成组织匀浆，离心。用肺组织上清液滴定HeLa细胞单层。用连接有过氧化物酶的鼠抗衣原体脂多糖单抗染色，以鉴定衣原体的感染性，感染强度以IFU表示［1］。1.4肺组织髓过氧化物酶检测［2］制备肺组织匀浆，沉淀物超声粉碎。上清液与25μlTMB底物液反应，以人髓过氧化物酶做标准品，在全自动酶标仪上读取650nmOD值。1.5MoPnmRNA的表达RT-PCR检测小鼠肺组织沙眼衣原体MoPnmRNA表达。

2结果2.1MoPn感染后小鼠肺组织衣原体生长见图1。图1显示，在感染后第2天，小鼠肺组织可检测到衣原体生长，IFU值增高。衣原体生长在感染后第7天达高峰，4只小鼠肺组织均检测到衣原体MoPnmRNA表达，见图2。图1衣原体感染C57BL/6小鼠肺组织衣原体活性略图2小鼠呼吸道沙眼衣原体感染后肺组织衣原体MoPnmRNA表达略2.2中性粒细胞髓过氧化物酶检测C57BL/6小鼠呼吸道感染衣原体MoPn后第2天，肺组织MPO活性明显增高，至第3天达高峰，以后逐渐下降，感染后21天恢复正常水平。说明中性粒细胞于感染后第2天在肺组织大量聚集。3讨论沙眼衣原体是影响人类健康的重要病原体，随着临床衣原体感染性疾病的日益增多，迫切需要深入了解衣原体感染的保护性免疫学机制。近年来，使用感染的动物模型在阐明衣原体感染的免疫生物学上取得了重要的研究进展。本研究采用适宜剂量的沙眼衣原体小鼠肺炎株，通过鼻腔吸入感染C57BL/6种系小鼠，结果导致小鼠衣原体肺炎的发生。肺组织出现以中性粒细胞为主的大量炎症细胞渗出。

小鼠生殖道衣原体感染模型证实，BALB/C鼠感染第1周生殖道大量中性粒细胞浸润及感染后第2周C3H小鼠输卵管持续炎症细胞浸润［3］。我们的研究也证实，C57BL/6种系小鼠呼吸道感染衣原体MoPn引起肺组织大量中性粒细胞浸润，与感染诱导的炎症性细胞因子IL-1、IL-6及TNFα的产生有关［4］。MPO是中性粒细胞氧依靠杀菌系统的基本成分。人类中性粒细胞MPO占细胞干重的5%，而单核白细胞MPO含量很低。故认为MPO是中性粒细胞的标志性酶。检测MPO可作为检测中性粒细胞聚集的常用方法［5］。

参考文献1YangX，GartnerJ，ZhuL，etal.IL-10geneknockoutmiceshowen-hancedTh-1-likeprotectiveimmunityandabsentgranulomaforma-tionfollowingChlamydiatrachomatislunginfection.JImmunol，1999，162：1010.

2BaiH，YangJ，YangX，etal.IntranasalinoculationofChlamydiatra-chomatismousepneumonitisagentinducessignificantneu-trophilinfiltrationwhichisnotefficientincontrollingtheinfectioninmice.Immunology，2005，114：246.

3Darville，T，C.W.Andrews，adJr，J.D.Sikes，etal.Earlylocalcy-tokineprofilesinstrainsofmicewithdifferentoutcomesfromchlamydialgenitaltractinfection.Infect.Immun，2001，69：3556-3561.

4白虹，谢蜀生，YangXi，等.沙眼衣原体肺感染中炎症性细胞因子的表达以及与机体防御的关系.免疫学杂志，2004，4：57.

5SchierwagenC，Bylund-FelleniusAC，LundbergC.ImprovedmethodforquantificationoftissuePMNaccumulationmeasuredbymyeloperoxi-daseactivity.JPharmacolMethods，1990，23：179.