前言本研究主要是探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体在原发性胆汁性肝硬化肝损伤中的作用,从新的角度揭示原发性胆汁性肝硬化的病理机制。首先应用自行建立的实时荧光定量RT-PCR方法检测了原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞TRAIL基因的表达;然后分别用流式细胞术及酶联免疫吸附术检测膜型及可溶型TRAIL蛋白,分析TRAIL与反映原发性胆汁性肝硬化严重程度的γ-谷氨酰转移酶和碱性磷酸酶的相关性。接着利用体外正常人肝细胞培养,与不同浓度的TRAIL蛋白和/或胆汁作用,在不同时间点,应用MTT法观察对细胞增殖能力的影响,PI染色法检测DNA含量及细胞周期,AnnexinV/PI法检测早晚期凋亡细胞,荧光染色分析线粒体损伤,细胞免疫化学染色法检测bcl-2分子的表达情况。本研究发现原发性胆汁性肝硬化患者外周血TRAIL基因与蛋白表达均明显增高,这种异常表达与原发性胆汁性肝硬化的发生和严重程度密切相关。重组表达的人TRAIL蛋白对正常人肝细胞具有凋亡作用,且有浓度和时间依赖性;胆汁可以促进其凋亡作用。线粒体损伤及bcl-2分子表达降低可能参与TRAIL和/或胆汁诱导正常人肝细胞损伤的作用。
ThisstudywasdesignedtoexploretheroleofTNF-relatedapoptosisinducingligandinliverinjuryofprimarybiliarycirrhosis,andrevealthenewpathomechanismofPBC.BasedonTaqMan-MGBprobetechnology,real-timefluorescentquantitativeRT-PCRwassetupandusedtodetecttheTRAILmRNAlevelinperipherybloodmononuclearcells（PBMCs）fromPBCpatients.Meanwhile,theTRAILlevelonPBMCswasdeterminedbyflowcytometryandtheplasmalevelofsTRAILwasmeasuredwithELISA.Inaddition,theass...
