【摘要】目的观察百草枯（PQ）急性中毒大鼠所致肺损伤（ALI）时一氧化氮（NO）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的变化，探讨川芎嗪对急性百草枯中毒所致肺损伤的保护作用。方法将50只SD大鼠随机分成5组，空白组、阴性对照组、阳性对照组、川芎嗪低剂量组和川芎嗪高剂量组。观察大体标本，组织病理以及生物学标志：肺湿/干重比、肺泡灌洗液中性粒细胞比和蛋白含量。同时测定肺组织NO含量和iNOS活性。结果与阴性对照组相比，川芎嗪低剂量组肺组织病理显示肺淤血、肺水肿明显减轻。其生物学标志均降低（P＜0.05或P＜0.01），NO和iNOS也降低（P<0.01）。结论NO及iNOS在百草枯所致大鼠肺损伤中起重要作用，川芎嗪能降低NO及iNOS水平，减轻百草枯中毒大鼠肺组织损伤。
【关键词】川芎嗪；百草枯；肺损伤；一氧化氮；一氧化氮合酶
EffectofLigustrazineonNOandiNOSinParaquat-inducedAcuteLungInjuryinRats
LIUHuifang,ZHAOYanyan,CUIYuying,CHENChunsheng
1.HealthProfessionalTechnicalCollege，Baoding071000,China;2.MedicalExperimentCentreofHebeiUniversity,Baoding,Hebei071000,China
Abstract：ObjectiveThevarianceofNOandiNOSinParaquat-inducedacutelunginjuredratswasinvestigated,andtheprotectionofligustrazineonratacutelunginjurywasapproached.Methods50Sprague-Dawley（SD）ratswererandomlydividedintofiveexperimentalgroups:blankgroup,negativecontrolgroup,positivecontrolgroup,ligustrazinelow-dosegroup（LDG）,ligustrazinehigh-dosegroup（HDG）.Macroscopicandhistopathologicalexaminationswereperformedandbiologicalindexesweremeasuredforthelungspecimens.Theindexesincludedlungwetweight/dryweight,theratsofneutrophilsandproteincontentinthepulmonaryalveolarlavagefluid.Inthemeantime,thecontentsoflungtissuehomogenateNOandiNOSweremeasured.ResultsComparedwithnegativecontrolgroup,lungcongestionandlungedemaofligustrazinelow-dosegroupweremitigated.Lungwetweight/dryweight,neutrophilinfiltration,andproteincontentweredecreased（P＜0.05orP＜0.01）,andbiologicalindexesoflunginjuryandthecontentsofNOandiNOSweresignificantlydecreased（P＜0.05orP＜0.01）.ConclusionNOandiNOSplayimportantrolesinlunginjuryofpoisonedrats.LigustrazinecanamelioratethelunginjuryanddecreasetheconcentrationsofNOandiNOS.
Keywords：Ligustrazine;Paraquat;Pulmonaryinjury;Nitricoxide（NO）;Induciblenitricoxidesynthase（iNOS）
百草枯（又名Paraquat,PQ，克无踪，克灭踪等）是有机杂环类接触性脱叶剂及除草剂，随着其广泛使用，引起大量中毒事件的发生，死亡率可高达85%～95%［1］。百草枯在肺组织中浓度比血浆浓度高10～90倍。5～7h达到肺内血浆浓度峰值，存留时间也较久，因此肺损伤最为严重，患者多死于呼吸窘迫综合征［2］。人们尝试用各种方法治疗百草枯中毒，但迄今尚无特效解毒剂。
川芎嗪（ligustrazine,Lig）是从伞形科植物川芎中提取的一种生物碱单体4-甲基吡嗪，具有抑制自由基产生、提高内源性超氧化物歧化酶（SOD）活性、清除氧自由基、免疫调节、抑制炎症和抗纤维化等多种生物学作用［3］，临床主要用于心脑血管疾病的治疗，最近有文献报道川芎嗪用于呼吸道疾病如急性肺损伤、气管炎等的治疗［4,5］，但其能否对抗百草枯中毒所致的肺损伤尚未见报道。我们拟就该药物在百草枯中毒治疗中的价值作一探索，为抢救百草枯急性中毒提供新的治疗药物。
1.1实验动物及分组
健康SD大鼠（250～300g）50只，雌雄各半，河北医科大学实验动物中心提供。称重后，空白对照组腹腔注射生理盐水30mg/kg，其他组腹腔注射20%百草枯溶液30mg/kg复制百草枯急性中毒模型。动物分组如下：①空白对照组（NS）：腹腔注射生理盐水4mg/kg。②阴性对照组（PQ）：腹腔注射生理盐水4mg/kg。③阳性对照组（D）：腹腔注射地塞米松0.5mg/kg。④川芎嗪低剂量组（LDG）：腹腔注射川芎嗪溶液4mg/kg。⑤川芎嗪高剂量组（HDG）：腹腔注射川芎嗪8mg/kg。以上5组动物每日均给药2次，连续给药3d。
1.2仪器与材料
20%PQ浓缩液（英国捷利康有限公司农药部）；川芎嗪注射液（北京市永康药业有限公司）；地塞米松磷酸钠注射液（郑州卓峰制药厂）；一氧化氮试剂盒，一氧化氮合酶测定试剂盒，考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒（均由南京建成生物工程研究所提供）。SHA-BA型双功能水浴恒温振荡器（金坛市杰瑞尔电器有限公司）；XW-80A型涡旋混匀器（上海沪西分析仪器厂）；TDL-5-A型离心机（上海安亭科学仪器厂）；501A型超级恒温器（上海实验仪器厂有限公司）；StatFax-2100型酶标仪（AWARENESSTECHN-OLOGYING）;TEK-11全自动三分群血细胞分析仪（江西博康科技有限公司）；DHG-9143BS-Ⅲ型电热恒温鼓风干燥箱（上海新苗医疗器械制造有限公司）；CKX41倒置生物显微镜（日本OLY-MPUS）。
2.1肺组织湿重/干重比、肺泡灌洗液（BALF）中细胞计数比、蛋白含量测定以及肺泡通透指数计算
开胸暴露出气管和双肺，夹闭右主支气管，用静脉输液针接注射器从气管缓慢注入无菌生理盐水灌洗左肺，共3次，第1次2ml，以后两次各1ml。取3mlBALF以1500r/min离心15min，上清液-70℃保存，灌洗液用全自动三分群血细胞分析仪细胞计数。用试剂盒测定蛋白含量。计算肺通透指数（肺泡灌洗液蛋白/血浆蛋白，LPI）。立即取出右肺，右肺下叶留做病理和生化指标测定。剩余右肺组织迅速用吸水纸吸取表面水分和血液，电子天平称湿重后，置烤箱（80℃，24h）烤至恒重，称干重，计算湿/干重比。
2.2NO测定
精密称取一定量的肺组织，在持续95%（体积分数）O2-5%（体积分数）CO2，37℃恒温条件下振荡孵育2h，取孵育液100μl，按试剂盒说明严格操作。
2.3肺组织iNOS活性的测定
速取肺组织适量，按1∶5（W/V）加入预冷的提取液，冰浴中匀浆，4℃，3000r/min离心10min，收集上清液，用考马斯亮蓝试剂盒进行蛋白定量，iNOS试剂盒测定提取液iNOS活性。
2.4组织学检查
如“2.1”取右肺下叶少许，经10%甲醛固定，石蜡包埋切片，HE染色后用显微镜观察肺组织损伤情况。
2.5统计学处理
实验资料以±s表示。两组以上资料采用One-wayANOVA分析、组间Newman-Student-Keuls检验进行统计学处理；两组资料采用Student'sttest处理。P<0.05为差异有统计学意义。 3结果
3.1肺湿/干重比、中性粒细胞比、蛋白含量测定
以及肺泡通透指数研究结果表明，与NS组相比，PQ组肺湿/干重比、中性粒细胞比、蛋白含量均显著增加（P＜0.01）；与PQ组相比，除HDG组肺湿/干重比、中性粒细胞比无统计学意义，其他各组肺湿/干重比、中性粒细胞比、蛋白含量均降低（P＜0.05或P＜0.01），因此百草枯所致肺损伤可使肺水增多，蛋白含量增多，并引起中性粒细胞在肺内聚集。用低剂量川芎嗪干预治疗后使这些指标显著下降，而高剂量效果不佳。结果见表1。表1肺湿/干重比和肺泡灌洗液中性粒细胞比、蛋白含量以及肺泡通透指数的变化（略）
3.2肺组织NO和iNOS的变化研究
结果表明，与NS组相比，PQ组肺组织NO浓度和iNOS活性显著增高（P＜0.01），说明百草枯可引起肺组织产生大量NO，并使肺组
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