巨细胞动脉炎患者血管白介素6与信号传递子和转录激活子3的表达水平及其相关性

巨细胞动脉炎患者血管白介素6与信号传递子和转录激活子3的表达水平及其相关性推荐到首页　□　《临床神经病学杂志》2008年第02期2/5页12345

　　keywords：giantcellarteritis;interleukin6;signaltransducerandactivatoroftranscription3;vascularsmoothmuscle

　　巨细胞动脉炎（gca）又称颞动脉炎、颅动脉炎和肉芽肿性动脉炎，是一种原因不明的系统性坏死性血管炎。gca的病因研究一直为各国学者关注，目前主要认为免疫机制参与了gca的发生与发展［１］。本研究对20例gca及6例其他神经系统疾病患者（对照组）的颞动脉白介素（il）6蛋白和信号传递子和转录激活子（stat）3蛋白表达水平进行检测，并分析其相关性。现报告如下。

　　1对象与方法

　　1.1对象（1）gca组：系1999年7月～2001年10月就诊于中南大学湘雅二医院神经内科的20例gca患者，男17例，女3例；年龄32～73岁，平均（48.7±10.7）岁；病程41～103d，平均（65.4±15.9）d；均符合1990年美国风湿病学会的5项经典诊断标准。同时，按系统性炎症反应程度相关的6项指标：低热、消瘦（≥4kg）、血沉增快（≥50mm/h）、c反应蛋白增高、贫血和白细胞数增高，将患者分为≥3项指标组（7例）和≤2项指标组（13例）。（2）对照组：同期住院的6例其他神经系统疾病患者（脑外伤、颅咽管瘤、胶质瘤、动脉硬化性脑梗死、淋巴瘤和鼻咽癌各1例），男5例，女1例；年龄30～73岁，平均（45.6±14.8）岁。

　　1.2方法

　　1.2.1颞动脉活检入组者均进行一侧颞动脉活检。患者仰卧位，偏侧头位，以颞浅动脉（尽可能选择有触痛或有结节的部位）为活检部位，常规消毒铺巾，戴无菌手套，以2％利多卡因沿颞浅动脉走行处局部浸润麻醉，麻醉满意后，沿颞浅动脉走行切开皮肤约3～4cm，钝性分离颞浅动脉，两端分别结扎，剪取结扎之间的动脉段约2～3cm，缝合皮肤。

　　1.2.2免疫组化染色动脉标本石蜡包埋，4μm连续切片；52℃恒温箱烤24h；二甲苯脱蜡至水，蒸馏水洗3×5min；3％h2o2阻断20min，蒸馏水洗3×5min；加入0.01mmol/l柠檬酸微波修复10min，于室温冷却；抗原修复液修复10min，pbs洗3×5min；正常羊血清封闭液封闭20min，pbs洗3×5min；滴加一抗（1∶100）;4℃过夜；pbs洗3×5min，加生物素标记二抗工作液孵育20min，pbs洗3×5min；加试剂sabc孵育20min，pbs洗3×5min；dab镜下显色；自来水洗净；苏木素复染；梯度乙醇脱水；二甲苯透明；封片；光镜观察；照相。用随试剂提供的照片作阳性对照，用pbs代替一抗作阴性对照。

　　1.2.3结果判定标准il6阳性细胞为镜下见胞浆内有综褐色颗粒，il6表达的量化依照hernandezrodriguez的判定标准，以高倍镜下（×400）中膜平滑肌层的阳性细胞百分数来判定：没有染色为0分；≤25%为1分；26%～50%为2分；51%～75%为3分；76%～100%为4分。stat3的量化标准为:以细胞浆着棕褐色颗粒为阳性，每张切片选取中膜平滑肌层的动脉区域，计数5个高倍视野的阳性细胞数，取平均值。

　　1.2.4统计学方法检测结果用均数±标准差（±s）表示，采用spss11.0统计软件进行分析，同一变量两样本均数比较用成组设计的t检验；两变量间相关关系用直线相关分析，计算pearson相关系数。

　　2.1两组颞动脉il6和stat3表达比较见表1。gca组患者颞动脉标本中均可见il6蛋白和stat3蛋白的表达（均为胞浆染色），广泛分布在血管内膜、中膜和外膜，在中膜肌层尤为明显。对照组il6蛋白和stat3蛋白在颞动脉内膜和中膜均有表达，以中膜血管壁平滑肌细胞表达明显。gca组il6和stat3蛋白的表达强度呈中～强阳性，对照组呈弱～中阳性，两组差异有统计学意义（均p<0.05）。gca组il6阳性细胞较为多样：在中膜，大部分il6阳性细胞为平滑肌细胞；在内膜，尤其是呈强阳性表达的患者中，纤维母细胞也表达il6蛋白；内膜、中膜交界处可见强阳性表达的淋巴细胞浸润。见图1、2。

　　表1gca组与对照组颞动脉中膜层il6和stat3表达水平的比较（略）

　　注：与对照组比较*ｐ<0.05

　　图1gca组颞动脉有较多il6阳性细胞（胞浆中有综褐色颗粒）（dab×200）（略）

　　图2gca组颞动脉有较多stat3阳性细胞（胞浆中有综褐色颗粒）（dab×200）（略）

　　2.2gca炎症指标≥3项组与≤2项组颞动脉il6和stat3蛋白表达的比较见表2。gca组炎症指标≥3项组il6和stat3蛋白阳性表达水平［（3.43±0.54）分，（49.18±9.05）个/高倍视野］显著高于炎症指标≤2项组［（2.54±0.66）分,（39.25±8.33）个/高倍视野］（p<0.01,p<0.05）。

　　表2gca炎症指标≥3项组与≤2项组il6和stat3表达水平比较（略）

　　注：与炎症指标≤2项组比较*p<0.05，△p<0.01

　　2.3il6和stat3蛋白表达水平的相关性gca患者颞动脉il6蛋白与stat3蛋白表达水平呈正相关（r=0.883，p<0.05）。